[发明专利]一种二噁英类化合物的制备方法、纯化方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种二噁英类化合物的制备方法、纯化方法及应用。

背景技术

神经氨酸酶（又称唾液酸酶，neuraminidase，NA）是分布于甲、乙型流感病毒被膜上的一种糖蛋白。其可以通过裂解细胞表面流感病毒受体末端的唾液酸残基，使子代病毒颗粒从感染细胞膜上释放，促进流感病毒在呼吸道扩散，因此，神经氨酸酶是抗流感病毒药物研发的重要靶标。目前临床上使用的神经氨酸酶抑制剂主要有扎那米韦、奥司他韦和帕拉米韦。扎那米韦的口服利用率较低，体内分布容积小，肾脏清除快，只能作为局部用药；奥司他韦在使用过程中，临床上出现大量耐药病毒株；帕拉米韦仅在全球少数国家批准上市。综上所述，设计合成或从化合物库中筛选出新型有效的神经氨酸酶抑制剂成为当前研究的热点和难点。

目前，4H-1,3-二噁英-2,4-二酮的制备方法主要是通过从阿魏蘑菇（Pleurotus eryngii var.ferulae）的子实体中提取得到，并且已有报道，该化合物具有抑制嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的作用。但是，上述制备方法中，阿魏蘑菇的来源比较局限，其仅产自新疆地区。同时，该制备方法中制得的4H-1,3-二噁英-2,4-二酮，收率较低，4千克的阿魏蘑菇子实体仅能制备得到5mg的该化合物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的4H-1,3-二噁英-2,4-二酮的制备方法中，原料来源受限，目标化合物的收率低等缺陷，而提供了一种二噁英类化合物的制备方法、纯化方法及应用。本发明的制备方法中的原料易得、制备周期短、工艺简单，并且更加绿色环保；且本发明制得的目标化合物收率高、纯度高；同时，该化合物对神经氨酸酶具有较强的抑制作用，其对于新型神经氨酸酶抑制剂类抗流感药物的设计和研究具有一定的指导意义。

本发明提供了一种如式I所示的化合物的制备方法，其包含下列步骤：

（1）将土曲霉（Aspergillus terreus）孢子粉溶液接种至种子培养基中培养，得种子液；其中，所述的土曲霉孢子粉溶液的添加量为0.5%～1.0%，所述的百分比是指土曲霉孢子粉溶液的体积占种子培养基体积的百分比；

（2）将所述的种子液接种至发酵培养基中培养7～10天，得含有如式I所示的化合物的发酵液；其中，所述的种子液与发酵培养基的体积比为1:120～1:180。

步骤（1）中，所述的土曲霉可为本领中常规的土曲霉或其变种，只要在发酵时能够产生如式I所示的化合物，即可。本发明优选土曲霉（Aspergillus terreus）PF26菌株，该土曲霉菌株已于2011年8月31日递交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.5208，该菌株已在CN102827777A中公布。所述的土曲霉孢子粉溶液较佳地为土曲霉孢子粉的甘油水溶液，其中，所述的甘油水溶液较佳地为质量百分比为40%的甘油水溶液，所述的百分比是指甘油的质量占甘油和水总质量的百分比。所述的土曲霉孢子粉溶液中，甘油水溶液与土曲霉孢子粉的体积质量比较佳地为40mg/mL。

步骤（1）中，所述的培养的方法和条件可为本领域常规的方法和条件，较佳地为：于25℃～37℃的条件下，在转速为150rpm～250rpm的摇床中震荡培养18～30小时，即可。所述的培养的时间较佳地为12～24小时。所述的种子培养基为本领域中常规使用的土曲霉的种子培养基。所述的种子培养基较佳地包含：0.2%～1.0%的酵母提取物、1.0%～3.0%的葡萄糖、0.5%～1.5%的蛋白胨，其余量为水；所述的种子培养基的pH值为5.0～6.0。

步骤（2）中，所述的培养的方法和条件可为本领域常规的方法和条件，较佳地，于28℃～37℃的条件下，在转速为150rpm～250rpm的摇床中震荡培养7～10天。所述的发酵培养基为本领域常规的土曲霉种子液的发酵培养基。所述的发酵培养基较佳地包含：2.0%～4.0%的葡萄糖、1.0%～3.0%的硫酸铵、0.5%～1.5%的酵母提取物、0.1%～0.2%的硫酸镁、0.005%～0.01%的硫酸亚铁，其余量为水；所述的发酵培养基中的pH值为5.0～6.0。

步骤（1）和步骤（2）中，所述的水一般为蒸馏水。

所述的含有如式I所示的化合物的发酵液，较佳地，还可进一步包含纯化的步骤。所述的纯化的步骤的方法和条件可为本领域常规的方法和条件，本发明优选包含下列步骤：

a.将所述的含有如式I所示的化合物的发酵液，进行固液分离的操作后，收集液体；用有机溶剂萃取后浓缩，得浓缩物A；