[发明专利]一种快速鉴别铁皮石斛的方法

说明书

技术领域

本发明涉及到一种快速鉴别中药真伪的方法，尤其是一种依据荧光显微特征来鉴别铁皮石斛的方法。

技术背景

铁皮石斛为兰科植物石斛属铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎，是一味名贵的中药，具有益胃生津，滋阴清热之功效，被誉为“九大仙草”之一。现代研究表明，铁皮石斛含有多种化学成分，包括多糖、联苄类、菲类、生物碱、黄酮、酚酸类、氨基酸及钙、镁、锌、铁、锰、硒、铜、铬、镍等人体新陈代谢的必须微量元素，具有增强机体免疫力、抗衰老、抗肿瘤、降血糖和有效减轻肝损伤等多种药理活性。

由于铁皮石斛具有多方面的药理活性，现在已成为保健品市场的新宠，受到了消费者的追捧。据报道，2011年仅浙江省铁皮石斛产业产值已超过20亿元，预计到2015年，浙江省铁皮石斛产业产值将超过50亿元。铁皮石斛市场需求大、但资源稀缺，以致近年来价格不断攀升。而石斛品种繁多，来源复杂，外形十分相似，尤其是加工成“枫斗”之后，不同品种的石斛很难辨认。许多不法商家在利益的驱使下，把其它种的石斛加工成“枫斗”冒充铁皮石斛，严重损害消费者利益，影响用药的安全性和有效性，造成“铁皮枫斗”市场混乱，阻碍整个石斛产业的发展。为了正本清源，2010版药典已把铁皮石斛Dendrobium officinale单列出来作为该药材的唯一来源。

近年来很多学者对铁皮石斛的质量评价进行了研究，特别是铁皮石斛的真伪鉴别研究。2010版中国药典规定可用传统显微鉴别法或薄层鉴别法对铁皮石斛的真伪进行判断[1]。Chen等将铁皮石斛和其他品种石斛中糖类及联苄类的化学成分进行了比较，寻找了铁皮石斛特征性成分，以此鉴别铁皮石斛和其他品种石斛[2]；Zhang等以分子生物学方法鉴别了铁皮石斛和其他品种石斛[3]。色谱鉴定法准确度高、能有效提供化学成分信息，可用于中药真伪优劣的鉴别，但需要对样品进行复杂的前处理及使用大量有机试剂，另外，化学成分对照品的难以获得及大型精密仪器高昂的购置成本等也限制了色谱鉴定的普及；而分子生物学技术鉴定法稳定性好、特异性强、所需样品量少，但存在技术复杂、成本偏高、专业技术人员缺乏等劣势。传统性状显微鉴别作为药材基源鉴定的重要手段，具有简捷、快速、准确、经济等优点，也被用于铁皮石斛的真伪鉴别中。但仍有分辨率低、精密度差、使用范围局限于有经验的鉴别者、只能提供中药材微观形态学特征，而不能提供中药中化学成分信息等不足之处。综合比较上述方法的利弊，建立一种快速、科学、实用的方法进行铁皮石斛的质量控制研究，在当今的市场形势下显得尤其重要。

荧光显微技术作为一种新的中药鉴别模式和手段，在中药质量控制研究中的应用正日趋成熟。荧光显微镜的原理是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。与普通光学显微镜相比，在荧光显微镜下观察有强烈的对衬背景，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于化学成分以及细胞结构和功能等的研究。按Wiff发色基团学说，化合物分子吸收了一定波长的光量子的能量后，发生极化并产生偶极矩，使价电子在不同能级间跃迁而形成不同的颜色。化合物分子结构中共轭链越长，颜色越深；分子量增加，特别是共轭双键数增加，颜色加深。因此，荧光显微镜既能提供显微形态信息，且不需要有经验的鉴别者，同时又能从一定的角度反应出其化学成分信息，并且简便、快速、高效、实用，可实现中药的即时鉴别，有效控制中药质量，在中药真伪优劣鉴别中的应用有广阔的前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴别铁皮石斛的方法，该方法有快速、低成本且不需要有经验的鉴别者的优势。

一种快速鉴别铁皮石斛的方法，包括以下步骤：

（1）通过观察，确定待测样品符合《中国药典》规定的铁皮石斛（拉丁学名CAULIS DENDROBII OFFICINALIS）的性状特征；

（2）将待测样品制成厚度小于500μm的样品切片；

（3）取样品切片置于物镜下在蓝色荧光下观察其显微特征，若观察到诸多大小相近的维管束，且鞘纤维细胞通常排列成双帽状，则该样品属于铁皮石斛，否则该样品不属于铁皮石斛。

进一步，所述步骤（3）中，铁皮石斛样品切片的荧光显微特征还包括：在蓝色荧光下，观察到角质层、表皮细胞壁、木质部细胞壁发绿色荧光；绿色荧光下，观察到角质层、表皮细胞壁发红色荧光。