[发明专利]一种油棕叶片扫描电镜样品制备方法

说明书

技术领域

本发明属于显微观察样品技术领域，涉及一种扫描电镜样品的制备方法，具体是一种油棕叶片扫描电镜样品制备方法。

背景技术

油棕（Elaeis guineensis Jacq.）属棕榈科的单子叶多年生木本油料作物，是世界上生产效率最高的产油植物，平均每公顷年产油量高达4.27t，是花生的5～6倍、大豆的9～10倍，有“世界油王”之称。油棕作为一种新兴的、潜力巨大的热带优良，将在食用油的供给方面发挥重要的作用，开发利用前景广阔。现今我国的油棕品种都是从国外引进的，对其在我国的适应性难以确定，需要经过长期的引种试种观察，才能确定能否在我国生产上应用，因此，开展油棕种质资源鉴定评价，对种质资源的创新利用至关重要。叶片解剖结构鉴定常作为评价植物适应性强弱的重要手段。

目前在油棕叶片解剖结构方面的研究主要通过石蜡切片的方法制成薄片，用于对其解剖结构的显微观察，但是通过石蜡切片制作的薄片仅能观察叶片的基本结构，而对油棕叶片表面的气孔分布状况、气孔的大小、叶片表面的纹路、表皮细胞垂周壁的样式等超微结构的观察和区别尚不能通过石蜡切片获得，不能够为种质资源的鉴定提供更为直接可靠、直接和稳定的证据，不利于油棕种质资源的鉴定和分类工作的开展。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种油棕叶片扫描电镜样品制备方法，通过脱水、干燥、镀膜等工艺，制备的扫描电镜样品结构完整，扫描电镜观察时叶片表面结构清晰完整，图像立体感强，有利于开展油棕超微结构的观察和研究，对于获得优良种质资源类型，培育或筛选适合我国栽培的种质资源类型或品种具有重要的意义。

本发明所采用的技术方案：

一种油棕叶片扫描电镜样品制备方法，其步骤如下：

1、固定液配制：取酒精、冰醋酸、甲醛按标准方法配制获得FAA固定液。

2、材料前处理：取油棕叶片，洗净擦干后迅速用刀片切取叶片中部、中脉两侧1cm×1cm的小段样品，洗净，再用FAA固定液固定，4℃保存24h，取出用纯水漂洗后，用于下一步的脱水。

3、脱水：分别用30%、50%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液进行梯度脱水，各20min。

4、干燥：将样品进行冷冻干燥36小时后，放入干燥器内待用。

5、样品台准备：在金属样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪出4mm×3mm的平整小段，顺序依次贴在导电胶布上。

6、样品镀膜：将干燥好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为l0～50nm的金膜，得到扫描电镜样品，可在扫描电子显微镜下观察。

所述冷冻干燥的温度在-45℃以下。

把制得的扫描电镜样品，用S—3000N（HITACHI）扫描电镜进行观察，图像模式为SE，束流38nA，工作距调到13mm，样品台倾斜度为0，亮度对比度为自动加手动，焦距为手动。加速电压为12KV，放大倍数为100-3000倍。观察到的叶片表面结构清晰，完整，立体感强，在低倍下能看到规律的气孔排列状况，高倍下可以看到表皮细胞的纹路和气孔的形态。

本发明操作步骤简便，制备的扫描电镜样品结构完整，扫描电镜观察时图像立体感强、叶片表面结构清晰完整，成本低，有利于开展油棕超微结构的观察和研究，对于获得优良种质资源类型，培育或筛选适合我国栽培的种质资源类型或品种具有重要的意义。

附图说明

图1是本发明所提供的扫描电镜样品图像（200X）。

图2是本发明所提供的扫描电镜样品图像（500X）。

图3是本发明所提供的扫描电镜样品图像（2000X）。

图4是本发明所提供的扫描电镜样品图像（3000X）。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。

实施例

1、固定液配制：以70%酒精90ml+冰醋酸5ml+甲醛5ml的体积比获得FAA固定液。