[发明专利]一种椰子叶片冷冻切片的制作方法

权利要求书

1.一种椰子叶片冷冻切片的制作方法，其特征在于，其步骤如下：

1）、材料前处理：取椰子叶片，洗净擦干后迅速用刀片切成2×4mm的小段样品；

2）、样品固定：在Leica LM1900冷冻切片机的冷台底座先加l～2滴OCT冷冻包埋剂，用硬质纸做成边长4～6mm、高7～10mm的长方体粘在底座上，然后再将叶片组织样品垂直置于平放在样品托上，再加3～6滴OCT冷冻包埋剂将叶片组织样品完全包裹住，并放在Leica LM1900冷冻切片机中的样品台上，放置10～20min，即可进行冷冻切片；

3）、冷冻切片：切掉样品的外面纸盒，把带有椰子叶片的包埋剂块——样品块切成3×5mm的大小；将刀片水平放稳，然后将粘有叶片的冷台固定在冷冻切片机的冷台固定槽上；先将切片厚度调节旋钮调至切片厚度35～50u m对样品块进行修片，待能够出现平整均匀的切片后调至5～7μm，箱体最低控制温度为-20℃，切片头最低控制温度为-10℃，摇动旋转手轮进行切片；

4）、展片和烤片：将切下来的切片贴到载玻片上，然后进行烤片，烤片时间在20～30min和温度为45℃；

5）、染色：把烤好的切片放入1%番红水溶液染色3～8h，然后用蒸馏水洗涤3～5次，放入30%酒精中静置30s～1min，95%乙醇洗涤至切片不褪色后，滴加50%甘油于材料表面，加盖玻片；待切片刚刚干燥时，立即在Leica DMILLED倒置生物显微镜下观察拍照。

2.根据权利要求1所述的椰子叶片冷冻切片的制作方法，其特征在于：所述叶片组织样品垂直置于平放的冷台前，先用清水冲洗，然后用纸将其表面上的残余液体吸干。