[发明专利]一种用于TAFI含量体外检测的试剂盒及其体外检测方法

权利要求书

1.一种用于TAFI含量体外检测的试剂盒，其特征在于：由TAFI快速检测试纸、样本稀释液组成，其中TAFI快速检测试纸由PVC板条、样品垫、金垫、NC膜和吸水纸组成；样本稀释液为磷酸盐缓冲液（PH6.8-7.4）。

2.按权利要求1所述用于TAFI含量体外检测的试剂盒，其特征在于：所述NC膜在检测线T线位置和质控线C线位置固定两种蛋白原料。

3.按权利要求1所述用于TAFI含量体外检测的试剂盒，其特征在于：样本稀释液由0-0.68%磷酸二氢钾、0-0.4%NaOH、0-1%Casein-Na、0-1%TWEEN20、0-1%PVP40、0-1%PEG20000、0-2%EDTA、0-0.5%SDS和余量为水组成。

4.按权利要求1所述用于TAFI含量体外检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒示踪标志物为胶体金。

5.一种按权利要求1所述用于TAFI含量体外检测的试剂盒的制备方法，其特征在于：TAFI快速检测试纸的制备方法为：

a.金垫的制备

1）取1ml胶体金加0-6ｕl的0.2M K₂CO₃，混合后再加入10-20ug浓度为3.68mg/ml的4E7抗体，得到体积为2.7-5.4ｕl的4E7抗体,混匀静置5-20min，加5-20ｕl BSA、PEG或者Casein-Na封闭，再次混匀静置5-20min，离心5-10min（9000r/min），弃上清，沉淀用30-100ｕl复溶液复溶；

2）取1ml胶体金，加0-6ｕl的0.2M K₂CO₃，混合后再加入15-25ug浓度为10mg/ml的兔IgG，得到体积为1.5-2.5ｕl兔IgG,混匀静置10min，加5-20ｕl20%的BSA、PEG或者Casein-Na溶液，混匀静置5-20min，离心5-10min（9000r/min），弃上清，沉淀用50ｕl复溶液复溶；

3）喷金：将4E7抗体和兔IgG各复溶的50ｕl两者1:1混合至100ｕl，混合后的样本通过加压的方式，以雾状均匀喷在玻璃纤维素膜上，45℃烘干0.5h-2h，密封干燥保存即为金垫。

b.NC膜的制备

包被工艺：将3B1抗体用PBS稀释至0.3-0.8mg/ml，羊抗兔用PBS稀释至0.5-1.5mg/ml分别固定在NC膜上T线和C线位置上，包被后室温晾干后，密封干燥保存待用；

c.安装

将样本垫、金垫、PVC板、固定好抗体的NC膜、吸水纸组装成试纸条即可，所述样本垫采用玻璃纤维素膜。

6.按权利要求4所述用于TAFI含量体外检测的试剂盒，其特征在于：试纸制作完成后直接装入卡壳中，卡壳上对应试纸条的样品垫处设置一个加样孔。

7.按权利要求4所述用于TAFI含量体外检测的试剂盒，其特征在于：复溶液为Tris0-0.5%；pvp400-1%；BSA0-1%；PEG200000-0.5%；10%蔗糖0-5%；TWEEN200-0.8%；10%叠氮钠2/万，余量为水。

8.按权利要求4所述用于TAFI含量体外检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒检测的血清或血浆样本中标志物的浓度范围为5-40ug/ml.样本稀释400-600倍使用。

所述试剂盒检测结果以T/C比值为测试值，即T线检测值和C线检测值之比为最终测试值。

9.一种按权利要求1所述试剂盒用于TAFI含量体外检测的方法：

步骤一  采集个体生物样品立即于30分钟内，4℃条件下离心取上清或样本静止后的上清作为待检样品，置于冰盒1小时内使用或-20℃保存备用；

步骤二  取样本，用样本稀释液进行稀释，可采用一步稀释或两步稀释均可，稀释倍数为400-600倍，稀释后将样本加到相应加样孔内，10min后将样本放入检测仪器中，即可得出检测最终结果。