[发明专利]细胞表面标志分子用于检测肝癌循环肿瘤细胞的用途

说明书

技术领域

本发明涉及细胞表面标志分子用于检测肝细胞肝癌循环肿瘤细胞的用途，具体涉及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3，GPC3）、去唾液酸糖蛋白受体（asialoglycoprotein receptor，ASGPR）1/2和/或细胞角蛋白组合（cytokeratins，CK）8/18/19在检测肝细胞肝癌循环肿瘤细胞中的用途。

背景技术

肝癌发病率和死亡率分别占全球恶性肿瘤第五和第二位，年死亡人数与新发病例数几乎相同，约60万。肝癌也是我国常见恶性肿瘤，发病率和死亡率分别占我国恶性肿瘤第三和第二位，其中肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是肝癌的主要类型，约70%死于肿瘤的转移复发。目前肝细胞肝癌以外科治疗为主，如肿瘤切除术和肝移植术，主要问题为术后转移复发。

循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）是从上皮来源的实体肿瘤脱落，进入外周血的肿瘤细胞。循环肿瘤细胞会随血流迁移到达合适的微环境，种植于远处器官，形成转移灶。

检测循环肿瘤细胞有助于发现早期微转移灶，可以用来动态监测肿瘤病情的发展，为评估患者预后及监测临床治疗效果提供参考信息。既往研究表明存在于外周血中的循环肿瘤细胞与较高的复发危险程度相关，现主要用于转移性乳腺癌、前列腺癌、结肠癌的临床检测，以辅助预后评估。

目前从外周血中检测循环肿瘤细胞的技术依照对象分为检测肿瘤细胞核酸和检测肿瘤细胞自身。肿瘤细胞核酸检测技术依赖于针对肿瘤细胞特异的DNA序列设计的RT-PCR和qPCR方法，假阳性率高，稳定性差；基于肿瘤细胞的检测技术依赖于肿瘤细胞表面特异表达的蛋白标志，富集肿瘤细胞后用细胞病理学的金标准直观地观察肿瘤细胞的形态，而成为循环肿瘤细胞鉴定的主流方法之一。CellSearch^TM系统自2004年以来被美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration,FDA）先后批准用于转移性乳腺癌、前列腺癌、结肠癌患者外周血循环肿瘤细胞检测，该方法也于2012年8月被我国食品药品监督管理局（China Food and Drug Administration,CFDA）批准用于转移性乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞的检测。CellSearch^TM系统的基本原理是基于捕获和富集外周血中带有上皮细胞表面标记上皮细胞粘附分子（epithelial cell adhesion molecule,EpCAM）的稀有的肿瘤细胞，将细胞表面带有EpCAM标记（EpCAM⁺）和细胞角蛋白（cytokeratins，CK）8、18及/或19标记（CK⁺），排除白细胞表面标记CD45（CD45^-）的有核细胞（细胞核染料4,6-联眯-2-苯基吲哚，4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI⁺）鉴定为乳腺癌、前列腺癌和结肠癌的循环肿瘤细胞。

然而，该方法不适用于肝细胞肝癌外周血循环肿瘤细胞的检测，因为研究表明：①仅仅有30%左右的肝癌细胞表面表达EpCAM；②不仅如此，表达EpCAM的肝细胞肝癌属于外周血中为数很少的肝癌肿瘤干细胞样细胞，其生物学特性和普通外周血循环肿瘤细胞有很大区别；③肿瘤具有异质性（heterogenicity），即由一个克隆来源的肿瘤细胞在生长过程中形成在侵袭能力、生长速度、对刺激的反应、对抗癌药物的敏感性等方面有所不同的亚克隆的过程。大约30%的上皮来源肿瘤细胞表面不表达EpCAM，具有异质性；④无论美国的FDA和中国的CFDA都没有官方授权批准用于检测肝细胞肝癌外周血循环肿瘤细胞的方法。因此，研究肝细胞肝癌代表性的细胞表面标志分子用以鉴定循环中肝细胞肝癌来源的有核细胞，即肝细胞肝癌的循环肿瘤细胞非常必要。

发明内容

本发明的发明人经过大量实验研究和反复摸索，找到了适合检测肝细胞肝癌的循环肿瘤细胞的细胞表面标志分子以及相应的检测方法，由此完成了本发明。

本发明第一方面涉及检测细胞表面标志分子的试剂用于制备检测肝细胞肝癌的循环肿瘤细胞的产品（例如试剂盒）的用途，所述细胞表面标志分子选自细胞表面表达CK8、CK18、CK19、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3，GPC3）、去唾液酸糖蛋白受体（asialoglycoprotein receptor，ASGPR）1、ASGPR2中的至少一种。