[发明专利]一种TAFI含量的体外检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种TAFI含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述该TAFI含量的体外检测试剂盒组成包括：含有与TAFI特异性结合的单克隆抗体纳米金标记物R试剂；用于制作计算待检样品中的TAFI抗原含量的标准曲线的TAFI标准品和TAFI质控品。

2.根据权利要求1所述的TAFI含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述纳米金标记物R试剂是针对重组人TAFI抗原所制备的鼠抗人单克隆抗体经纳米金标记所得，鼠抗人单克隆抗体包含3B1和4E7，两种鼠抗人单克隆抗体纳米金结合物的混合比例为1:2。

3.根据权利要求2所述的TAFI含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述3B1为特异性结合TAFI和失活的TAFI，所述4E7仅与TAFI结合。

4.根据权利要求1所述的TAFI含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述生化仪设置为单试剂检测时，纳米金标记物R试剂的组分是偶联了3B1和4E7两种抗体的纳米金及其保存液；所述生化仪设置为双试剂检测时，纳米金标记物R试剂的组分包含R1、R2试剂，R1试剂是单4E7偶联的纳米金及其保存液，R2试剂是单3B1偶联的纳米金及其保存液。

5.根据权利要求4所述的TAFI含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述保存液是由Tris0-0.5%；pvp400-1%；BSA0-1%；PEG200000-0.5%；10%蔗糖0-5%；TWEEN200-0.8%；叠氮钠0-0.02‰，NaCl0.85-1.5%.PEG60001-4%,余量为水组成。

6.根据权利要求4所述的TAFI含量的体外检测试剂盒，其特征在于：当R为单试剂：具体制备方法为：每1ml纳米金使用0-20μl的0.2MK₂CO₃调节PH值后，按照1-25μgTAFI抗体，反应2-15min后，加入BSA、PEG、Casein等进行封闭，封闭时间为2-15min，离心纯化，离心时间为3-20min，转速为5000-12000r/min,离心后去上清，沉淀使用含TRIS0-2%、Casein-Na0-2%、PEG200000-4%、BSA0-4%、TWEEN200-4%、PVP400-5%、蔗糖0-10%、叠氮钠0-0.5‰的纳米金复溶液进行复溶，纳米金复溶后，加入含PEG60000-20%、Casein-Na0-5%、NaCl0-25%的纳米金稀释液，比例为1:1。两种抗体标记后按照1:2混合后的溶液即为R试剂；

当R为双试剂：具体制备方法为：取1ml纳米金加0-6ｕl的0.2M K₂CO₃，混合后再加入10-20ug的4E7或3B1抗体，混匀静置5-20min，加5-20ｕl BSA、PEG或者Casein-Na封闭，再次混匀静置5-20min，离心5-10min，转速为9000r/min，弃上清，沉淀用1-2ml复溶液复溶，复溶后补充NaCl,PEG6000,使得NaCl终浓度为0.85-1.5%，PEG6000终浓度为；1-4%。最后使用0.45um的滤膜过滤后，密封保存既得R1或R2试剂，R1和R2按照1/4至4/1比例混合后既得R试剂，所述复溶液为Tris0-0.5%；pvp400-1%；BSA0-1%；PEG200000-0.5%；10%蔗糖0-5%；TWEEN200-0.8%；叠氮钠0.02‰，余量为水。