[发明专利]唑来膦酸佐剂及含唑来膦酸佐剂的疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种唑来膦酸免疫佐剂，以及含唑来膦酸佐剂的疫苗，属于免疫学技术领域。

背景技术

佐剂是一类与能免疫原性物质特异性或非特异性结合，诱发机体产生长期、有效的特异性免疫反应，发挥辅助作用的物质。佐剂能够减少免疫原的用量，降低疫苗的生产成本。近年来依托现代生物技术和基因工程的迅猛发展，疫苗的研制取得了很大的进步，重组亚单位疫苗、抗独特型抗体疫苗、核酸疫苗及合成肽疫苗等得到开发，但由于这些疫苗存在着分子小、免疫原性弱、靶向性差等因素，难以诱导机体产生有效免疫应答，因此需要应用佐剂来增强其免疫原性或增强宿主对抗原免疫应答。

铝佐剂是第一个被批准并普遍用于人类的疫苗佐剂，其作用机理是形成抗原贮藏库；产生颗粒性抗原来促进抗原提呈给免疫细胞； 使抗原滞留，缓慢释放，从而吸引活性淋巴细胞，激活补体系统。但多年实践证明,铝佐剂对于小分子量抗原增强免疫应答的效果不够理想，可引起局部刺激症状和不良反应，此外铝盐还可能导致神经退行性疾病的发生。随着研究者对于佐剂作用机制的深入研究和分子生物学的发展，人们将会更有针对性的选择合适的疫苗佐剂来预防和治疗疾病，而佐剂的应用也将会更加安全高效，但目前可供使用的人用佐剂并不多。因此开发研制新型的免疫佐剂有着重要的意义。

唑来膦酸为第三代的二磷酸盐类药物，主要用于治疗骨质疏松、乳腺癌, 多发性骨髓瘤, 肺癌, 前列腺癌以及多种实体瘤引起的骨转移和高钙血症。唑来膦酸能阻断肿瘤细胞产生的各种各样的刺激因子可诱导钙离子的释放, 减慢骨转移的发生和发展, 可直接导致某些肿瘤细胞的死亡。近年来研究发现唑来膦酸不仅可以抑制肿瘤及骨相关疾病，还可以作用于机体免疫系统，如刺激γδT淋巴细胞增殖，刺激树突状细胞（DCs）成熟。因此我们对唑来膦酸的佐剂效应进行了相关研究，发现该化合物具有较好的免疫增强效用，可以作为疫苗佐剂应用于多种疫苗。

发明内容

为解决现有疫苗佐剂存在毒副作用、价格昂贵等问题，本发明提供一种安全、有效、稳定的唑来膦酸佐剂以及含有唑来膦酸佐剂的疫苗。

本发明所述唑来膦酸在制备疫苗佐剂中的应用。

所述唑来膦酸为市购医用产品，分子式为C₅H₁₀N₂O₇P_2 `H₂O，分子量为290.10，结构式如图1所示，在人体中推荐剂量：为每200μL疫苗液中，唑来膦酸用量不超过2mg，优选10～50μg。

本发明提供的含有唑来膦酸佐剂的疫苗，其特征在于每单份疫苗剂中含有10～50μg唑来膦酸。

本发明提供的含有唑来膦酸佐剂的疫苗经过下列方法制备：

按每单份疫苗剂加入10～50μg唑来膦酸的量，在疫苗中加入唑来膦酸后，再加生理盐水至100－200ul，按常规混合，得含有唑来膦酸佐剂的疫苗。

所述每单份疫苗剂为临床或者动物实验中使用的常规单次注射参考量。

所述疫苗为常规甲肝抗原、乙肝抗原、狂犬病毒抗原中的一种。

    唑来膦酸佐剂能显著增强抗原特异性的体液免疫反应。

本发明与现有技术相比具有下列优点和效果：（1）唑来膦酸佐剂的毒、副作用小，在免疫剂量范围内使用是安全可靠的；（2）唑来膦酸佐剂能够有效的诱导抗原特异性的体液免疫应答，且其所诱导的体液免疫应答效果接近铝佐剂；（3）唑来膦酸佐剂原料易得，为市售产品，性能稳定，可作为多种疫苗的佐剂。

附图说明

图1为唑来膦酸分子结构式。

具体实施方式

下面结合实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。文中所述的较佳条件实施方法仅作示范之用。

实施例1

本发明提供的含有唑来膦酸佐剂的疫苗是：在每单份HAV抗原（即动物实验中使用的单次注射剂量）中，加入10μg唑来膦酸注射液，再加生理盐水至200ul，按常规混合后，得含有唑来膦酸佐剂10μg、甲肝抗原18EU的甲肝疫苗。

所述，HAV抗原为市购的抗原滴度为512EU/ml的18EU HAV抗原液，购自中国医学科学院医学生物学研究所，所述唑来膦酸为市购的唑来膦酸注射液，购自江苏扬子江药业集团有限公司。

实施例1所得含有唑来膦酸佐剂的甲肝疫苗，其免疫试验和效果如下：

A、免疫