[发明专利]一种甲型流感病毒Vero细胞冷适应株及其应用有效
| 申请号： | 201410039468.1 | 申请日： | 2014-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN103898066A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 廖国阳;李卫东;杨景晖;周芳烨;马磊;周健;蔡玮;寸怡娜;高菁霞;张新文;戴宗祥;姜述德 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医学生物学研究所 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93 |
| 代理公司： | 昆明正原专利商标代理有限公司 53100 | 代理人： | 徐玲菊 |
| 地址： | 650118 *** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 流感病毒 vero 细胞 适应 及其 应用 | ||
1.一种甲型流感病毒Vero细胞冷适应株，命名为A/Yunnan/1/2005Vca (H3N2)，该毒株的微生物保藏号为：CCTCC NO. V201253。
2.如权利要求1所述甲型流感病毒Vero细胞冷适应株在制备流行株的Vero细胞适应株中的应用。
3.如权利要求1所述甲型流感病毒Vero细胞冷适应株在制备流感疫苗中的应用。
4.一种甲型流感病毒Vero细胞冷适应株的制备方法，其特征在于经过以下步骤：
A. 在24小时长成致密单层的Vero细胞上，接种1MOI的血凝滴度达到1:1024的甲型流感病毒A/kunming/1/2005Va（H3N2）；
B. 在维持母液成分为MEM或DMEM/F12，青霉素-链霉素2万U/ml，谷氨酰胺溶液0.3－0.6mg/ml，牛血清白蛋白1mg/ml，TPCK-胰酶浓度0.5－1.5ug/ml，pH7.0－7.2，30±1℃条件下，培养步骤A的甲型流感病毒72小时后，收获病毒液；
C. 将步骤B收获的病毒液反复冻融3次，再接种到24小时长成致密单层的Vero 细胞上，再重复步骤B和C，如此在Vero细胞上连续传20代，并维持种毒细胞收获液的血凝滴度在1:1024，得传代甲型流感病毒；
D. 在24小时长成致密单层的Vero细胞上，接种1MOI步骤C的传代甲型流感病毒；
E. 在维持母液成分为MEM或DMEM/F12，青霉素-链霉素2万U/ml，谷氨酰胺溶液0.3－0.6mg/ml，牛血清白蛋白1mg/ml，TPCK-胰酶浓度0.5－1.5ug/ml，pH7.0－7.2，25±1℃条件下，培养步骤D的传代甲型流感病毒120－168小时后，收获病毒液；
F. 将步骤E收获的病毒液反复冻融3次，接种到24小时长成致密单层的Vero 细胞上，再重复步骤E和F，如此在Vero细胞上连续传72代，并维持种毒细胞收获液的血凝滴度在1:1024，得甲型流感病毒Vero细胞冷适应株。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述步骤A的甲型流感病毒A/kunming/1/2005Va（H3N2）为现有的甲型流感病毒Vero细胞高产适应株，其保藏号为：CCTCC NO.V200514。
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