[发明专利]VEGF抗体及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及新的VEGF抗体及其制备方法和用途。

背景技术

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）为一种同源二聚体糖蛋白，在人体内具有促进血管内皮细胞分裂、增殖以及诱导血管形成等作用。VEGF会通过促进血管生成引起肿瘤快速生长，是一个重要的肿瘤药物靶标。

VEGF抗体可以与VEGF结合抑制其生理活力，进而抑制肿瘤的快速生长，另外，VEGF抗体还可以治疗老年黄斑变性疾病。常用的抗体有全抗体、Fab、单链抗体等。目前，VEGF抗体大多为全抗体，如，贝伐单抗(bevacizumab,Avastin)、HuMV833单抗、VEGF-Trap抗体，也有少部分单链抗体，如贝伐单抗的单链抗体。这些抗体药物分子量大，不易穿过血管壁，导致局部药物浓度偏低，药效受限；同时也因为分子量较大，存在免疫原性高的缺陷。

VH单域抗体是近年来出现的一类小分子抗体，其仅含有全抗体的重链可变区(VH)的一类抗体，其分子量大约为全抗体的1/10，免疫原性低，穿透性好，有利于提高靶向区域的药物浓度。但是，因单域抗体缺乏轻链可变区，难以形成抗原结合域，普遍存在无抗原结合能力或者结合能力极低的问题。

发明内容

为解决现有VEGF抗体存在的问题，本发明提供了新的VEGF抗体及其制备方法和用途。

本发明提供了VEGF单域抗体，它的氨基酸序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:6任意一项所示。

单域抗体，是指只有完整抗体重链可变区的抗体。

SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:6所示的单域抗体分别命名为：Vh-VEGF(Vh)、Vh-VEGF/Y31（Y31）、Vh-VEGF/Q61（Q61）、Vh-VEGF/YDA（Vh-YDA）、Vh-VEGF/30（30）、Vh-VEGF/94（94），它们的氨基酸序列如下所示：

Vh（SEQ ID NO.1）：

MEVQLEQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINAYTGEPTYAADFKRRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSLEGGGS；分子量为14.46kD。

Y31（SEQ ID NO.2）：

MEVQLEQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTYYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINAYTGEPTYAADFKRRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSLEGGGS；分子量为14.51kD。

Q61（SEQ ID NO.3）：

MEVQLEQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTYYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINAYTGEPTYAQDFKRRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSLEGGGS；分子量为14.56kD。

Vh-YDA（SEQ ID NO.4）:

MEVQLEQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTDTYYGMGWVRQAPGKGLEWVGWINAYTGEPTYAADFKRRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSLE；分子量为14.178kD。

30（SEQ ID NO.5）:

MEVQLEQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTDTNYGMGWVRRAPGKGLEWVGWINAYTGEPTYAADFKRRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYPFLYCNSEWYFDVWGQGTLVTVSSLVGGGS；分子量为14.41kD。

94（SEQ ID NO.6）:

MEVQLEQSGGGLVQPGGSLRLSCVASGYTDTNYGMGWVRQAPGKGLEWVGWINAYTGEPTYAADFKRRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYPNFCWCSRWYFDVWGQGTLVTVSSLVGGGS；分子量为14.45kD。