[发明专利]一种鉴别印楝油的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药用植物的鉴别领域，具体地，涉及一种鉴别印楝油的方法。

背景技术

印楝油是从印楝(Azadirachta indica A.Juss)果子中榨取的植物油，具有拒食驱避、降低昆虫肠道活力、抑制昆虫生长发育、抑制和阻止昆虫蜕皮、抑制成虫交配产卵等作用，是制造各生物农药的理想原料。具有杀虫谱广、害虫不易产生抗药性、环境中无残留等特点，能与多种农药及杀菌剂混配。在印度和孟加拉等过度，印楝油最常应用于肥皂、护发产品、身体乳液及护手霜等护理保养产品。印楝油使用的范围从皮肤疾病、感染、发炎症、发烧，甚至应用于风湿症的舒缓等。

印楝油成分复杂，各组分分析较难。通常，人们对印楝油进行皂化得到了印楝油的总脂肪酸甲酯， 然后用 GC或GC-MS定性测定其中所含高级脂肪酸的相对含量[①罗喜荣，等. 中国油酯2002, 27(4): 78. ②李俊峰，等. 云南民族大学学报2005, 14(3): 278.]。其中主流方法GC色谱法由于受非色谱条件（如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等）影响较大和需用标准品等等原因，重复性和可行性均存在许多局限性； GC-MS分析方法存在MS离子化程度和基质干扰等问题。

IGD核磁共振碳谱偶联（IGD ¹³C NMR coupling）指纹图谱技术，也叫反门控去偶核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术，该技术是在已研究多年的核磁共振氢谱（¹H NMR）指纹图谱技术[赵天增，等.1HNMR指纹法鉴定植物中药，中草药2000，31(11)：868-870]的基础上联合其他技术（例如目前应用最广泛的高效液相（HPLC）指纹图谱技术[谢培山等，中药色谱指纹图谱，人民卫生出版社，2005]）提出的一种新的非单一手段综合指纹图谱技术。

印楝油IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱的研究与应用，对印楝油的鉴别和评价提供了一条新的思路，也为加强印楝油内在成分研究的系统化与标准化，实现与国际接轨提供了科学的保证。随着该技术在其他中药材及其提取物、植物源农药中的推广应用，该技术的重大科学价值必将日趋突出。

发明内容

为解决现有技术的问题，本发明目的在于提供一种鉴别印楝油的方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种鉴别印楝油的方法，其包括以下步骤：

1）取印楝油或印楝油衍生品直接作为含有脂肪酸活性成分组的特征提取物；

2）对所述特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式（IGD核磁共振碳谱指纹图谱）测定出所述各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度；

3）通过定量分析手段得到所述标准参照品的绝对含量；

4）利用各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度的比值和所述标准参照品的绝对含量，计算出印楝油或印楝油衍生品中各活性成分的含量及该类活性成分的总含量，即活性成分组的含量。

其中，步骤2）中，对特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，溶解特征提取物的溶剂为氘代氯仿（CDCl₃）；特征提取物和所述溶剂的质量体积比为190:1－210:1（mg:ml），优选200:1。

步骤2）中，特征提取物中的活性成分特征峰为羰基吸收峰（即C-1吸收峰），其化学位移为δ_C 170.0－185.0。

步骤2）中，所述峰强度可以采用峰高法、面积积分法或重量法计算。

步骤3）中，所述定量分析手段为气相色谱（GC）法；所述标准参照品的绝对含量是指：用定量分析手段测定的标准参照品的质量百分含量。

进一步地，所述特征提取物中的活性成分的标准参照品为油酸甲酯。

其中，步骤4）中，计算各活性成分含量的偶联公式为：

；其中：

W₁为步骤3）用定量分析手段测定的印楝油或印楝油衍生品中某一活性成分对应的标准参照品的绝对含量；

M₁为所述印楝油或印楝油衍生品中某一活性成分对应的标准参照品的分子量/定量峰对应的碳个数；

h₁为由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的印楝油或印楝油衍生品中某一活性成分对应的标准参照品的特征峰峰强度；

W_n为印楝油或印楝油衍生品中某一活性成分的质量百分含量；