[发明专利]一种海藻酸钙支架的制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种海藻酸钠支架的制备方法，具体讲是涉及一种可用于脊髓损伤修复的纤维状海藻酸钙支架的制备方法，其属于一种脊髓组织工程材料。 

背景技术

脊髓损伤后会造成各种感觉、运动功能障碍，是严重威胁人类健康的一种重大疾病。每年都有许多患者由于交通事故或其他外部创伤引起脊髓损伤从而造成瘫痪或者死亡。现如今并没有一种受到普遍认可的治疗方式来解决这一难题。成年哺乳动物脊髓损伤后，于损伤处的微环境中，受损的中枢神经的神经元轴突自主再生能力非常弱。但是现今许多研究已经表明，损伤的中枢神经在适当的治疗干预下，创建的适合微环境中，受损神经轴突可以再生并代替部分原有神经的传导功能。

适当组织工程材料植入脊髓损伤处，即可以起到损伤处微环境的改善作用，促进脊髓损伤的修复，为解决脊髓损伤这一难题提供了一种可能的治疗方案，并成为近来脊髓损伤修复研究的热点。组织工程材料构建时，组织工程支架作为损伤修复的主体，对脊髓损伤部位的微环境的改善起到很重要的作用，另外作为种子细胞和有助于神经损伤修复的细胞因子或药物的载体，其性能的优劣是组织工程材料对脊髓损伤修复起何种作用的关键所在。

海藻酸盐是一种从褐藻中分离出来的天然高分子聚合物，为β-D-甘露糖醛酸（M）和α-L-古洛糖醛酸（G）链接而成。海藻酸盐为水溶性，可被多种二阶阳离子交联。由于Ca²⁺反应条件温和，且无毒性，所以在生物医学应用中，Ca²⁺为交联海藻酸盐的首选。

制作纤维孔状的海藻酸钙支架时，可以对空隙大小进行控制，使之满足脊髓损伤轴突再生所需的空间，其在脊髓损伤处有很好的生物相容性并对脊髓损伤修复起到良好促进作用，作为一种脊髓损伤修复的植入材料有广泛地应用前景。

发明内容

本发明的解决的技术问题是构建一种与人体有良好生物相容性和并在体内有优良生物降解性的海藻酸钙支架材料，使之植入脊髓损伤处能够起到脊髓损伤修复的促进作用。

一种海藻酸钠支架的制备，按以下步骤进行：

    1）、称取取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1%-4%的海藻酸钠溶液；

    2）、将步骤1）的制得的海藻酸钠溶液通过真空泵抽取或者静置12h去除溶液中的气泡，使用注射器注入24孔板中，再次通过真空泵抽取或者静置12h去除溶液中的气泡；

3）、将步骤2）所得溶液-20度冷冻12-24h，-50度真空冷冻干燥6-10h，得到多孔状海藻酸钠海绵；

4）、将步骤3）中得到的多孔状海藻酸钠海绵切片；

    5）、将步骤4）所得海藻酸钠海绵加入50mM CaCl₂、200mM NaCl溶液中反应30min；

    6）将步骤5）所得海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗3次，每次3min；

    7）将步骤6）所得海藻酸钙海绵-20度冷冻24h，-50度真空冷冻干燥6-10h得到多孔状海藻酸钠海绵；紫外灭菌2h，即制得海藻酸钙支架。

    所述海藻酸钙支架经扫描电镜观察，支架表面呈纤维状分布。

所述海藻酸钠支架其应用于脊髓损伤修复。

本发明的优点在于：本申请制作的海藻酸钙支架表面呈纤维孔状分布，是天然可降解材料，与人体有良好的生物相容性。其纤维孔状结构，可以为损伤处脊髓再生轴突的延伸提供引导作用和必需的生长空间，并阻碍胶质瘢痕的形成及对神经轴突延伸有抑制作用的细胞因子的产生，可以很好的起到支架作用，有效促进脊髓损伤的恢复，在脊髓损伤修复中，有巨大的应用前景。

附图说明

图1是海藻酸钙支架的表面形态扫描电镜图；

图2是海藻酸钙支架植入脊髓损伤大鼠与不植入支架的损伤对照大鼠脊髓损伤处的HE染色对比，a为损伤对照组，b为海藻酸钙支架植入组；

图3是海藻酸钙支架植入脊髓损伤大鼠与损伤对照大鼠脊髓损伤处的NF-H染色对比（经复染，黑色箭头指向损伤处的NF-H），a为损伤对照组，b为海藻酸钙支架植入组；

图4是海藻酸钙支架植入脊髓损伤大鼠与损伤对照大鼠脊髓损伤处的GFAP染色对比（黑色箭头指向损伤处的胶质瘢痕），a为损伤对照组，b为海藻酸钙支架植入组。

具体实施方式

以下将结合实例对本发明做进一步详细说明。并结合附图对本发明进行详细描述。

实施例1：

制作放下按以下步骤进行：

1)   取海藻酸钠0.15g，溶于10ml蒸馏水中，制成1.5%的海藻酸钠溶液；