[发明专利]建立版纳甜龙竹芽尖高效再生体系的方法

权利要求书

1.版纳甜龙竹芽尖高效再生体系的建立方法，其特征是按下列步骤进行：

(1)侧芽愈伤组织的诱导培养：从生长健壮的无病斑和虫疤的版纳甜龙竹植株中取侧芽为外植体，自来水下冲洗1h，用质量比浓度为1％的次氯酸钠真空抽滤15分钟，无菌水冲洗5-6次，在超净工作台上切长度为1±0.2cm的芽尖，接种于诱导培养基中，基本培养基MS(Murashige and Skoog)，添加外源激素2，4-D即2，4-二氯苯氧乙酸和6-BA即6-苄基腺嘌呤，2，4-D浓度为3-5mg·L^-1，6-BA浓度为0.5-1mg·L^-1，再添加500mg·L^-1的CH即水解酪蛋白、500mg·L^-1的Pro即脯氨酸和500mg·L^-1的Gln即谷氨酰胺：调节pH为5.7，在25±2℃温度中暗培养，诱导培养30±2d，愈伤组织形成：

(2)愈伤组织继代培养：取淡黄色颗粒状愈伤组织接种于继代培养基中，继代培养基的基本培养基为MS，添加外源激索为浓度0.1-0.5mg·L^-1的2，4-D，有机添加物、pH值和诱导培养基相同，在25±2℃温度中暗培养30±2d；

(3)分化培养：选致密颗粒状的愈伤组织在分化培养基中诱导幼苗分化，分化培养基以MS为基本培养基，添加浓度为1-2mg·L^-1的6-BA、浓度为0.3-0.5mg·L^-1的NAA即萘乙酸、浓度为0-2mg·L^-1的KT即激动索；pH值5.7，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃；

(4)生根培养：当分化培养出的再生植株长至4-6cm高时移入生根培养基中进行生根培养，基本培养基为1/2MS，添加外源激素为3-5mg·L^-1的IBA即吲哚丁酸，pH值5.7，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃；

(5)再生植株的炼苗和移栽：3-4周后根长粗、健壮时，将试管苗置于光强为20000lux的强光下炼苗一周后从试管中取出苗，用40±2℃的温水洗净根部的培养基，移栽于泥炭∶珍珠岩∶蛭石的体积比为1∶1∶1的混合基质中进行单株套袋培养，每天浇一次透水，一周后剪去塑料套袋两角，两周后脱去套袋，待长出新叶时移栽至温室，培养出健壮的再生植株苗。