[发明专利]基于AllGlo探针荧光定量PCR的血浆microRNA检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.检测三种血浆miRNA的特异引物，其特征在于所述三种血浆miRNA分别是指hsa-miR-504、hsa-miR-133b、cel-miR-39；其中hsa-miR-504与hsa-miR-133b为人源性miRNA，cel-miR-39为线虫来源的miRNA，作为一种外源性参照miRNA，从血浆提取开始加入血浆中，作用在于能够从提取miRNA开始监测整个实时荧光定量PCR的全过程；

所述检测三种血浆miRNA的特异引物包括三种血浆miRNA特异性逆转录引物和三种血浆miRNA特异性正向引物；

所述三种血浆miRNA特异性逆转录引物由hsa-miR-504的特异性逆转录引物、hsa-miR-133b的特异性逆转录引物和cel-miR-39的特异性逆转录引物组成；

所述hsa-miR-504的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1 5＇-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACGATAGAGT-3＇；

所述hsa-miR-133b的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.2 5＇-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACTAGCTGGT-3＇；

所述cel-miR-39的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.3 5＇-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCAAGCTGA-3＇；

所述三种血浆miRNA特异性正向引物由hsa-miR-504的特异性正向引物、hsa-miR-133b的特异性正向引物和cel-miR-39的特异性正向引物组成；

所述hsa-miR-504的特异性正向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.4 5＇-GCTGGTTAAGACCCTGGT-3＇；

所述hsa-miR-133b的特异性正向引物核苷酸序列为SEQ ID NO.5 5＇-TAGCGTCTTTGGTCCCCT-3＇；

所述cel-miR-39的特异性正向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.6 5＇-CAGAGTCACCGGGTGTAAAT-3＇。

2.三种血浆miRNA特异性AllGlo探针，其特征在于所述三种血浆miRNA分别是指hsa-miR-504、hsa-miR-133b、cel-miR-39；其中hsa-miR-504与hsa-miR-133b为人源性miRNA，cel-miR-39为线虫来源的miRNA，作为一种外源性参照miRNA，从血浆提取开始加入血浆中，作用在于能够从提取miRNA开始监测整个实时荧光定量PCR的全过程；

所述三种血浆miRNA特异性AllGlo探针由hsa-miR-504的特异性AllGlo探针、hsa-miR-133b的特异性AllGlo探针和cel-miR-39的特异性AllGlo探针组成；

所述hsa-miR-504的特异性AllGlo探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.7MAR-CTGGATACGACGATAGAGTGC-MAR；

所述hsa-miR-133b的特异性AllGlo探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.8JUP-CTGGATACGACTAGCTGGTTGA-JUP；

所述cel-miR-39的特异性AllGlo探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.9NEP-TGCACTGGATACGACCAAGCT-NEP；

所述三种血浆miRNA的通用引物序列的核苷酸序列为SEQ ID NO.10 5＇-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3＇。

3.基于AllGlo探针荧光定量PCR的血浆microRNA检测试剂盒，其特征在于设有盒体、隔板、miRNA提取试剂瓶、茎环逆转录试剂瓶、实时荧光定量PCR试剂瓶；隔板设在盒体内，miRNA提取试剂瓶、茎环逆转录试剂瓶、实时荧光定量PCR试剂瓶插在隔板上，miRNA提取试剂瓶内装有miRNA提取试剂，茎环逆转录试剂瓶内装有茎环逆转录试剂，实时荧光定量PCR试剂瓶内装有实时荧光定量PCR试剂。