[发明专利]一种基于数字PCR平台检测基因缺失突变的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种基于数字PCR平台检测基因缺失突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）制备数字PCR混合液：含有待检测基因DNA模板的样品、正向和反向检测PCR扩增引物、标记TaqMan探针、PNA探针、正向和反向质控PCR引物、质控TaqMan探针以及PCR预混液混合，制备得到数字PCR混合液；

所述的正向和反向检测PCR扩增引物用于扩增含有缺失突变的基因；所述的标记TaqMan探针与突变位点下游DNA模板结合；

所述的质控PCR引物用于扩增待检测的DNA模板的保守序列；质控TaqMan探针与质控PCR引物所扩增的序列结合；

标记TaqMan和质控TaqMan探针是连接荧光基团和猝灭基团的核苷酸，两者的荧光基团类型不同；

（2）数字PCR混合液制作PCR微反应液滴，再进行PCR扩增反应；

（3）收集信号并进行结果判断：对PCR扩增反应后的产物进行信号收集，根据荧光信号的类型判断则待测样品中是否含有发生基因缺失突变的DNA模板及其数量和含量。

2.权利要求1所述基于数字PCR平台检测基因缺失突变的方法，其特征在于，所述荧光基团选自6-羧基荧光素、六氯-6-羧基荧光素、Cy5、Cy3或VIC，猝灭基团选自6-羧基四甲基若丹明、BHQ1、BHQ2或MGB。

3.权利要求1所述基于数字PCR平台检测基因缺失突变的方法，其特征在于，所述PNA探针与待检测的基因发生突变的野生型DNA模板互补。

4.PNA探针用于制备基于数字PCR平台检测基因缺失突变的试剂盒，其特征在于，所述PNA探针与待检测的基因发生突变的野生型DNA模板互补。

5.PNA探针用于基于数字PCR平台检测基因缺失突变，其特征在于，所述PNA探针与待检测的基因发生突变的野生型DNA模板互补。

6.标记TaqMan探针用于制备基于数字PCR平台检测基因缺失突变的试剂盒，其特征在于，所述的标记TaqMan探针与突变位点下游DNA模板结合。

7.标记TaqMan探针用于基于数字PCR平台检测基因缺失突变，所述的标记TaqMan探针与突变位点下游DNA模板结合。

8.一种基于数字PCR平台检测基因缺失突变的试剂盒，其特征在于，包括以下物质中的至少一种：

（1）与未发生突变的野生型DNA模板互补的PNA探针；

（2）与突变位点下游DNA模板结合的标记TaqMan探针；

（3）用于扩增待检测基因的正向和反向PCR扩增引物；

（4）用于扩增待测基因所在DNA模板上保守序列的正向和反向质控PCR引物；

（5）与待测基因所在DNA模板上保守序列结合的质控TaqMan探针。