[发明专利]制备含有受者干细胞的免疫惰性胎肝悬液的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品领域，特别是涉及制备含有受者干细胞的免疫惰性胎肝悬液的方法。 

背景技术

胎肝含有造血干细胞、问充质干细胞等干细胞。1959年，国外已开始利用胎肝于200目的金属网上研磨制成细胞悬液注入人体的临床实验，但是，由于供者遗传背景与受者不相同，大约经过45天，供者细胞会被受者免疫系统逐渐删除掉，而且用的是1～5个月的胎肝，其中的造血干细胞大部分迁移到了脾和骨髓组织中。 

把动物的器官移植到人类，首先要对动物的基因组进行改造，使人的免疫系统不会对动物器管的血管内皮细胞产生超急排斥，即把动物(器管、组织或细胞的供者)的基因组中会引起人(器管、组织或细胞的受者)免疫排斥的基因“敲出”，同时插入人的基因，(以下把经过这种基因改造的动物简称为“免疫惰性供者”)，这项技术现在已接近初步临床应用了，目前首选的动物是猪，2011年，南京医科大学就引进了这种猪。 

发明内容

本发明的目的是提供制备含有受者干细胞的免疫惰性胎肝悬液的方法。其步骤特征为：1、把受者的体细胞传化成iPS细胞；2、把iPS细胞注入免疫惰性供者的囊胚里；3、然后囊胚移植到假孕的动物子宫中发育成胚胎；4、胚胎发育到肝脏造血旺盛期在无菌条件下取出胎肝；5、把胎肝制成单细胞悬液，添加抗冻剂在液氮中保存。 

本发明的胎肝肝悬液由于胎肝年龄幼稚，因此比来自骨髓的干细胞有更大的多向分化和增殖潜能，其中人的多能成体干细胞的遗传背景与受行的人相同，因此，不会遭到受者免疫系统的排斥，可以在受者体内长期生存和发挥作用。由于采用免疫惰性供者，故不易与人发生超急排斥，因此具有安全度较高，注射后其中的动物细胞会逐渐被人的免疫系统删除殆尽。 

具体实施方式

下面对本发明做进一步详细描述。 

按此目的提供的制备含有受者干细胞的免疫惰性胎肝悬液的方法，其步骤特征为：1、把受者的体细胞转化成iPS细胞；2、把iPS细胞注入免疫惰性供者的囊胚里；3、然后囊胚移植到假孕的动物子宫中发育成胚胎；4、肝胎发育到肝脏造血旺盛期在无菌条件下取出胎肝。此外，羊水、脐带血、胎盘和胚胎的其它器管组织也可以提取人的成体干细胞；5、把胎肝制成细胞悬液，添加抗冻剂在液氮中保存。 

所述的受者为人；所述的免疫惰性供者为猪。 

为了增加胎肝中人的干细胞数量，可以事先对免疫惰性供者的囊胚用辐射等方法进行致弱处理或在免疫惰性供者的胎肝还没有造血之前先切除免疫惰性供者的卵黄囊或用注射抗体交联毒素删除免疫惰性供者的胚胎中卵黄囊的干细胞。 

在鼠胚切除卵黄囊时发现，虽然心跳如前，但是胎肝不能造血，也没有发现造血干细胞，若加入卵黄囊.胎肝就会出现造血干细胞和恢复造血。 

网上下载的资料：干细胞可使奶牛“返老还童”：美国科学家发现，来自于克隆牛胎肝的大汤匙量的干细胞注射到相当于人类80岁的年老奶牛体中，奶牛的免疫系统和血管的健康状况还原到奶牛1岁前的水平。 

不过，本发明只用于科研，而不用于去老化(De-aging)或治疗功能受损的脏器。 

本发明的各种技术是现成的，这里无需赘述，请查看相关文献。