[发明专利]一种特异性靶向肿瘤淋巴管的新型多肽TMVP1的获得及应用

说明书

一、技术领域：

本发明涉及一种特异性靶向肿瘤淋巴管的新型多肽TMVP1的获得及应用，其技术特征在于：利用细菌鞭毛随机肽库技术体外对重组活性蛋白VEGFR-3的胞外区进行筛选，通过化学合成多肽进行体内外功能验证，获得了一段特异性靶向肿瘤淋巴管的五肽“TMVP1”。发明内容属于肿瘤的生物治疗领域。

二、背景资料：

肿瘤淋巴管生成介导的淋巴道转移是大多数实体瘤播散的早期事件，是其难以根治和高病死率的重要原因。长期以来由于缺乏淋巴内皮特异性标记物和淋巴管生成模型使得对肿瘤淋巴管生成的研究相对滞后于肿瘤血管生成。随着淋巴管生成分子机制及更多相关因子研究的不断深入，抗淋巴管生成途径有望成为继肿瘤手术、放化疗之后，一种用于肿瘤转移预防和治疗的新途径。明确恶性肿瘤组织中淋巴管内皮细胞的特异性标记物，进而针对淋巴管内皮细胞探索早期靶向阻断肿瘤淋巴转移新方法，达到阻断恶性肿瘤淋巴道转移的目的，具有重要的理论和现实意义。

长期以来，大多数关于肿瘤转移的研究都集中于肿瘤的血道转移，事实上绝大多数恶性肿瘤，尤其是实体瘤转移的早期主要是通过淋巴道进行，相关前哨淋巴结的转移情况决定了肿瘤患者的临床分期、治疗方案的制订和预后的评估。因而，针对肿瘤淋巴道转移的诊断和治疗在肿瘤转移的诊断和治疗中占有绝对重要的地位。明确肿瘤淋巴管内皮细胞(LECs)的分子标志及生物学行为的变化是研究癌症淋巴道转移机制及开展分子靶向治疗的前提。既往因为缺乏淋巴管的特异性标记物，在鉴定组织中的淋巴管、分离纯化淋巴管内皮细胞上存在技术上的困难，鉴别淋巴管的方法只局限于形态学和繁琐的差别染色法，因此淋巴系统在分子生物学方面的研究始终没有长足的进步，近年来仅发现了数种相对特异表达于淋巴管内皮的特异性标志物LYVE-1、podoplanin、prox-1、VEGFR-3，但尚未发现绝对特异的淋巴管标志物。多项研究报告证明VEGF-C／VEGFR-3信号通道可介导实体瘤内及肿瘤周边新生淋巴管生成，促进肿瘤细胞易于移动、浸润并促使肿瘤细胞易于转移，VEGF-C／VEGFR-3信号通道是肿瘤淋巴管生成的中心性环节，对该信号途径的阻滞研究有望成为抗肿瘤淋巴转移治疗新的有效手段。同时，针对肿瘤新生淋巴管生成机制而研制出的特异性拮抗剂亦有望成为肿瘤靶向治疗的一种新方法，而这正是目前该领域面临的主要难题。

肿瘤分子靶向治疗是利用具有一定特异性的载体，将药物或其他杀伤肿瘤细胞的活性物质选择性地运送到肿瘤部位，把治疗作用或药物效应尽量限定在特定的靶细胞、组织或器官内，而不影响正常细胞、组织或器官的功能，从而提高疗效、减少毒副作用的一种方法，又称为“导弹治疗”。靶向性多肽是目前认为比较理想的一种肿瘤靶向性治疗的载体，它们具有：①血浆清除速度快、高亲和力、高特异性；②良好的组织穿透性，能被肿瘤细胞摄取；③易于化学合成并且低免疫原性的特点，可减少、避免上述单克隆抗体的不足。因而近年来，许多学者将目光转向应用肽库技术寻找能与肿瘤细胞、肿瘤血管内皮细胞特异性结合的短肽，以达到靶向肿瘤的目的。肽库技术是将基因型、表型及分子结合活性与噬菌体／细菌的可扩增性结合在一起，是一种高效的筛选技术。目前已成功的应用于抗原表位分析、单抗筛选、蛋白质功能拮抗多肽或模拟多肽的确定等方面。Arap W等对乳腺癌荷瘤小鼠进行肽库筛选后获得一系列与肿瘤血管特异性结合的短肽，其中的RGD序列被证实可与αV整合素结合。将RGD序列与阿霉素交联后应用于荷瘤小鼠，发现药物的抗肿瘤疗效显著增加而毒性作用明显减少。Laakkonen P等利用噬菌体肽库筛选获得靶向乳腺癌肿瘤及其淋巴结转移灶的导向性多肽LyP-1，为早期诊断肿瘤及其转移灶靶向性治疗奠定了基础。

淋巴管生成是一个复杂的生物学过程，在众多肿瘤转移过程中淋巴管转移也是的重要扩散途径。肿瘤细胞播散到区域淋巴结是大多实体肿瘤进展的早期，也是肿瘤分期和预后的重要的决定因素。淋巴管生成被认为是肿瘤细胞转移到区域淋巴结过程中发挥了举足轻重的作用。因此，通过开发抗淋巴管生成的药物来靶向肿瘤的淋巴管，以阻止某些肿瘤淋巴管的生成并靶向抑制肿瘤细胞经淋巴管转移可能构成一种新的肿瘤分子靶向治疗模式。临床应用中可以将效应片段如免疫毒素、病毒载体与多价的靶向分子联用，以克服效应片段的低肿瘤渗透性，非特异性毒性和免疫原性等问题。研制开发出的靶向性抗肿瘤淋巴管生成与转移的新型生物制剂，可有效抑制恶性肿瘤新生淋巴管的生成及转移；同时减轻对正常组织的毒副作用，从根本上改善基因治疗的安全性问题，对高效、安全的靶向性治疗药物的研发具有指导意义，可望推动恶性肿瘤分子靶向治疗的发展与进程。

三、发明内容：