[发明专利]生产奥利万星前体A82846B的方法及培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于生产奥利万星前体A82846B的方法及培养基。

背景技术

A82846B是一种天然的糖肽，是从诺卡氏土分离的东方拟无枝酸菌（Amycolatopsis orientalis）的培养基中分离的发酵产物，该糖肽的化学结构除多含一个4-表-万古胺（4-epi-Vancosamine）外与万古霉素相似，分子式是C₇₃H₈₈N₁₀O₂₆Cl₂，其抗菌活性比万古霉素大4～8倍，其阻断细胞壁合成的作用机理与其他糖肽如万古霉素和Teicoplanin相同。

奥利万星（oritavancin）是以A82846B为前体的半合成糖肽类抗生素。奥利万星是最初由美国礼来公司研发，后转让给美国Targanta Therapeutics生物制药公司，对革兰阳性菌有广谱抗菌效果（包括耐万古霉素细菌），用于治疗皮肤感染、肺炎球菌感染和全身感染的适应征，目前均处于Ⅲ期临床研究阶段。同时，奥利万星是第一个进入大规模临床试验的二代半合成糖肽类抗生素，作用机制与万古霉素、达巴万星和替考拉宁相似，但是，因其生物活性更强，半衰期更长，从而具有诱人的开发前景。随着耐药菌的不断出现，具有良好抗MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）和VRE（耐万古霉素肠球菌）作用的抗生素的开发速度却十分的缓慢。因此，奥利万星的出现给临床治疗耐药菌带来了新的希望和突破，而其前体A82846B的微生物发酵工艺也倍受业内人士的瞩目。目前，A82846B主要由美国Targanta Therapeutics生物制药公司通过发酵进行生产，其报道的发酵培养基中的组分和含量为：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、10.0g/L的胰蛋白胨、2.0g/L的CaCO₃和20.0g/L的糖蜜，发酵培养的温度为30℃，发酵培养的时间为260h，但是，上述发酵培养基进行发酵后菌体活力较差，发酵单位较低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的培养基用于生产奥利万星前体A82846B的发酵单位低以及菌体活力差的缺陷，而提供了一种用于生产奥利万星前体A82846B的方法及其种子培养基和发酵培养基。本发明的种子培养基和发酵培养基及生产方法可以大大提高A82846B的发酵单位，提高生产效率，适用于奥利万星前体A82846B的大规模生产。

本发明提供了一种用于生产奥利万星前体A82846B的种子培养基，所述的种子培养基包含酵母粉、聚合蛋白胨、麦芽浸粉和葡萄糖；所述的种子培养基的pH值为6.5～7.5。

所述的酵母粉的含量较佳地为3g/L～5g/L。所述的聚合蛋白胨的含量较佳地为10g/L～15g/L，更佳地为11g/L～13g/L。所述的麦芽浸粉的含量较佳地为3g/L～5g/L。所述的葡萄糖的含量较佳地为15g/L～20g/L，更佳地为15g/L～17g/L。以上含量是指1L发酵培养基中各组分的质量。

本发明还提供了一种用于生产奥利万星前体A82846B的发酵培养基，所述的发酵培养基包含碳源、氮源和矿物质；所述的碳源的含量为30g/L～180g/L；所述的氮源的含量为5g/L～60g/L；所述的矿物质的含量为2g/L～5g/L；所述的碳源包含葡萄糖、糊精和红糖；所述的氮源包含蛋白胨和/或水解酪蛋白；所述的矿物质包含碳酸钙（CaCO₃）；以上含量是指1L发酵培养基中各组分的质量；所述的发酵培养基的pH值为6.5～7.5。

所述的发酵培养基中，所述的碳源的含量较佳地为50g/L～105g/L。所述的氮源的含量较佳地为5g/L～30g/L。所述的矿物质的含量较佳地为2g/L～4g/L。

所述的发酵培养基还可按照本领域常规的酸碱调节剂进行调节，使得发酵培养基的pH值在6.5～7.5之间。

所述的发酵培养基中，所述的葡萄糖的含量较佳地为10g/L～20g/L。所述的糊精的含量较佳地为10g/L～50g/L。所述的红糖的含量较佳地为10g/L～60g/L，更佳地为40g/L～60g/L。所述的蛋白胨的含量较佳地为5g/L～30g/L。所述的水解酪蛋白的含量较佳地为5g/L～10g/L。所述的碳酸钙的含量较佳地为1g/L～5g/L。

所述的糊精可为本领域常规使用的糊精，较佳地包含土豆糊精和/或麦芽糊精。其中，所述的土豆糊精的含量较佳地为0～40g/L；所述的麦芽糊精的含量较佳地为0～50g/L，且土豆糊精和麦芽糊精的含量不同时为0。