[发明专利]基于PCR技术的VX2肿瘤标志物探针

说明书

本发明提供了一种基于PCR技术的VX2肿瘤标志物探针，其特征在于，包括一组荧光定量PCR引物和探针：上游引物：5’‑TCAGCTTCGTCTGCGTCTGT‑3’；下游引物：3’‑GCGGATAGCAGTCGATTCAAG‑5’；以及用于PCR实时定量检测的带有荧光基团的碱基序列。本发明根据所选取的Shope病毒的DNA片段所设计的探针对于VX2肿瘤的发生及发展均具有极佳的指示作用。

技术领域

本发明涉及一种基于PCR技术的VX2肿瘤标志物探针，属于分子生物学领域。

背景技术

使用裸鼠建立的肿瘤动物模型需要使用小动物专用的影像设备（比如animalPET/CT）去观察肿瘤生长或放化疗后改变。但是小动物成像设备比较昂贵，只在少数研究中心配备。而兔VX2肿瘤动物模型可以在临床型（病人使用）的显像设备上进行肿瘤观察，因此有很多的学者使用VX2动物模型进行肿瘤学的研究。临床上肿瘤性疾病的诊断和疗效评价的非创伤性检查，除影像手段之外，依靠多种特异性血清肿瘤标志物，如：癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）、前列腺抗原（PSA）等，被广泛使用。兔VX2肿瘤是Shope病毒在兔皮肤上诱发而产生的恶性鳞癌，可接种在兔的肝脏、肺脏、骨骼、肌肉和颅脑等处，是目前唯一可以制成的大型哺乳动物动物模型。目前观察VX2肿瘤多使用影像方法，缺少一种高度特异性的生物标志物探针。

发明内容

为解决上述问题，本发明采用了如下技术方案，

本发明提供了一种基于PCR技术的VX2肿瘤标志物探针，其特征在于，包括：

上游引物：5’-TCAGCTTCGTCTGCGTCTGT-3’；

下游引物：3’-GCGGATAGCAGTCGATTCAAG-5’；以及用于PCR实时定量检测的带有荧光基团的碱基序列。

另外，本发明的基于PCR技术的VX2肿瘤标志物探针，还可以具有这样 的特征：其中，带有荧光基团的碱基序列为，

5’-FAM-CTCCAGAAGCCATAAGA-MGB-3’。

发明作用与效果

根据本发明的基于PCR技术的VX2肿瘤标志物探针，由于采用荧光定量PCR分子探针测定组织以及循环血中Shope病毒E区DNA片段含量，因此能够作为指示兔VX2肿瘤标志物的探针。

附图说明

图1是本发明实施例的标准质粒的示意图；

图2是本发明实施例的标准质粒PCR绝对定量曲线；

图3是本发明实施例的标准曲线；

图4是本发明实施例的¹⁸FDGPET-CT检查结果；

图5是本发明实施例的肿瘤组织病理分析的结果；

图6是Shope病毒DNA与FDGPET糖代谢值之间的相关性曲线；

图7是Shope病毒DNA基因组的示意图；

图8是肿瘤组织Shope病毒DNA与循环血DNA的相关性曲线；以及

图9是¹⁸FDG-PET的SUV_max值与肿瘤体积的相关性曲线。

具体实施方式

本实施例中未注明具体条件的实验方法均按照生物化学或分子生物学常规实验的常规条件（例如参考本领域可用的教科书，如《最新分子生物学方法》、《分子克隆实验室手册》等等）或按照制造厂商所建议的条件，利用生物化学或分子生物学常规实验的常规试剂进行试验。