[发明专利]一种洁净制备壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒基因载体的方法

权利要求书

1.一种制备壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒基因载体的方法，其特征在于，该方法以含有咪唑类阳离子的离子液体作为反应介质，将聚乙烯亚胺与壳聚糖经羰基化反应共价接枝制备得到壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒基因载体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有咪唑类阳离子的离子液体是1,3-二烷基咪唑类阳离子和阴离子构成的离子液体，具有通式I的结构：

其中：

R₁和R₂各自独立选自H或C_1-10烷基；

Xˉ选自氯离子、溴离子、氟硼酸根离子、六氟磷酸根离子、六氟锑酸根离子、六氟硒酸根离子或氯铝酸根离子。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述R₁和R₂各自独立选自C_1-4烷基。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述Xˉ选自氯离子、氟硼酸根离子、六氟磷酸根离子或氯铝酸根离子。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

（1）在惰性气体氛围、50-200℃下，将壳聚糖溶解于所述含有咪唑类阳离子的离子液体中，搅拌均匀，制得质量百分含量为0.5-15%的壳聚糖溶液；

（2）在步骤（1）的壳聚糖溶液中，加入羰基化试剂，在0-100℃、搅拌反应2-6h后，再加入聚乙烯亚胺，在0-100℃、继续搅拌反应2-6h；

（3）反应完毕，反应液中加入1-10倍反应液体积的无水乙醇，搅拌、静置沉淀，抽滤，得滤饼；

（4）滤饼用去离子水透析3-5d，冷冻干燥，得产品；

其中，在步骤（2）中，羰基化试剂与壳聚糖的质量比为0.3-3:1，聚乙烯亚胺与壳聚糖的质量比为0.1-1.5:1。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤（3）中，抽滤得到的滤液在40-70℃下减压蒸馏，蒸出乙醇，回收余下的离子液体，重复使用。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述的羰基化试剂为羰基二咪唑、碳酰氯、碳酸二甲酯中的一种。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的壳聚糖的重均分子量为1000-200000Da，脱乙酰度为65-95%。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的聚乙烯亚胺的重均分子量为600-3000Da。

10.权利要求1-9的任一项所述的方法制备的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒基因载体向细胞内转染外源基因中的应用。