[发明专利]一种可降解玉米赤霉烯酮毒素的非过氧化物酶酶组分的分离方法

权利要求书

1.一种可降解玉米赤霉烯酮毒素的非过氧化物酶酶组分的分离方法，其特征在于包含以下具体步骤： 

（1）接种1～3%(v/v)不动杆菌Acinetobacter sp.SM04菌悬液到M2培养基中，培养24～48h； 

（2）将步骤（1）中的液体培养物冷冻离心收取上清液，过滤，滤过液在45～55℃下浓缩8～10倍成粗酶液； 

（3）将步骤（2）所得的粗酶液加入阴离子型葡聚糖凝胶柱中，用pH7.0、6.5、6.0、5.5、5.0的磷酸钠盐缓冲液进行梯度洗脱，分段收集，测定各管组分的A_280nm值，选取A_280nm≥1.0的收集管进行ZEN降解酶活力测定；合并ZEN降解酶活力高于30%的各管； 

（4）将步骤（3）获得的ZEN降解酶组分在45～55℃下浓缩8～10倍，加入到阳离子型葡聚糖凝胶柱中，用Tris-HCl缓冲液以恒定流速洗脱，分段收集，测定各管的A_280nm值，选取A_280nm≥1.0的收集管进行ZEN降解酶活力测定；合并ZEN降解酶活力高于30%的各管； 

（5）将步骤（4）获得的ZEN降解酶组分在45～55℃下浓缩8～10倍，重新加入到阴离子型葡聚糖凝胶柱中，用pH7.0、6.5、6.0、5.5、5.0的磷酸钠盐缓冲液进行梯度洗脱，分段收集；测定各管组分的A_280nm值；取第二个吸收峰的各管成分进行ZEN降解活力检测；合并ZEN降解活力高于50%的各管； 

（6）将步骤（5）所得的ZEN降解酶组分在45～55℃下浓缩8～10倍，即为最终的不动杆菌降解ZEN非过氧化物酶酶组分。 

2.根据权利要求1所述的可降解玉米赤霉烯酮毒素的非过氧化物酶酶组分的分离方法，其特征在于：还包括如下步骤： 

A、将步骤（6）所得的降解ZEN非过氧化物酶酶组分用12.5%(w/v)聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，考马斯亮蓝染色后，获得步骤（6）中所得的降解ZEN非过氧化物酶酶组分内所包含的蛋白及其对应的分子量；获得四条蛋白条带，分子量分别为41kDa、30kDa、28kDa、19kDa； 

B、将步骤（6）所得的降解ZEN非过氧化物酶酶组分在pH3～12下测定过氧化物酶活力。 

3.根据权利要求1所述的可降解玉米赤霉烯酮毒素的非过氧化物酶酶组分的分离方法，其特征在于：步骤（1）中所述的不动杆菌Acinetobacter sp.SM04， 于2011年12月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5524； 

步骤（1）中所述的Acinetobacter sp.SM04菌悬液的OD值为OD₆₀₀=0.6～1.0； 

步骤（1）所述的培养的条件为28～32℃、150～200r/min。 

4.根据权利要求1所述的可降解玉米赤霉烯酮毒素的非过氧化物酶酶组分的分离方法，其特征在于：步骤（1）中所述的M2培养基的制备步骤如下：取12.5～17.5g乙酸钠，2.5～3g NH₄NO₃，1.2～1.5g K₂HPO₄·3H₂O，1～1.5g KCl，0.4～0.6g MgSO₄·7H₂O，加入10mL微量元素储备液，加蒸馏水定容至1000mL，混合后调节pH至7.0～7.5； 

所述的微量元素储备液的配方如下：2g/L FeSO₄·7H₂O，0.5g/L MnSO₄·4H₂O，0.4g/L CuSO₄·5H₂O，0.5g/L CoCl₆·6H₂O和0.4g/L ZnCl₂。