[发明专利]甜叶菊组织培养方法及其培养基

权利要求书

1.甜叶菊组织培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)外植体采集

对于室外栽培的植株，选取无病、虫损害的甜叶菊植株，采摘植株顶端第一、二对已经完全展开，但未老熟的叶片作为外植体；

对于无菌组培苗，可使用长势良好、健康的组培苗的所有叶片；

(2)消毒接种

采摘自室外栽培植株的叶片用流水冲洗30分钟，在超净工作台上用75％酒精处理6～8秒后再用0.1％升汞浸泡8分钟，倒去升汞溶液，用无菌水冲洗4～5次，每次不少于半分钟，然后用无菌纸吸干表面水分并避免相互重叠，并接种到增厚诱导培养基中；

组培苗叶片可不经消毒，在无菌条件下采摘后直接接种；

接种时将完整的叶片正面接触增厚诱导培养基表面，若接种时叶片还存有叶柄，则将叶片基部弯曲，叶柄插入增厚诱导培养基，并保持叶片接触培养基；

(3)增厚诱导培养

叶片接种到增厚诱导培养基上后，培养至7～9天后叶片出现肉质增厚，叶片肉质增厚特征表现为，叶片增厚，表面密布透明颗粒，叶片质地脆而易断；

(4)出芽成苗

将第(3)步所得的肉质增厚叶片转接进入出芽成苗诱导培养基，在无菌培养室内，先完全遮光暗培养1周，再光培养1～2周后，叶片开始在中脉两侧或叶尖长出紫红色的芽，每片叶片出芽个数约8～14个，每一个芽经继续培养后颜色转绿，并独成一株再生苗，待苗生长至高3～5cm后进入下一步骤；

(5)转接生根

将3～5cm高的苗相互分开成单株，保证每株苗有叶片5～7枚，转接插入配置好的生根诱导培养基，生根培养约3周后，苗基部长出多条绿色根，并有明显白色根毛后，进行下一步骤；

(6)炼苗移栽

将生根的苗连同培养容器一同移出无菌培养室，在控制温度为正常室温的育苗室内放置2～3天后，揭开培养容器盖子或封口膜再放置2～3天，期间保持育苗室内湿度在80％以上，之后用清水洗净根上附着的培养基，移栽入喷洒过多菌灵500倍液的室外土壤中，并保持土壤湿润。

2.根据权利要求1所述的增厚诱导培养基，其特征在于：包括，MS+苄基腺嘌呤6-BA 0.1～1.0mg/L+萘乙酸NAA 0.1～0.5mg/L+0.7％琼脂。

3.根据权利要求2所述的增厚诱导培养基，其特征在于：包括，MS+苄基腺嘌呤6-BA 0.4mg/L+萘乙酸NAA 0.1mg/L+0.7％琼脂。

4.根据权利要求1所述的出芽成苗诱导培养基，其特征在于：包括，MS+萘乙酸NAA 0.4～1.0mg/L+苄基腺嘌呤6-BA 1.0～2.5mg/L+0.7％琼脂。

5.根据权利要求4所述的出芽成苗诱导培养基，其特征在于：包括：MS+萘乙酸NAA 0.5mg/L+苄基腺嘌呤6-BA 2.0mg/L+0.7％琼脂。

6.根据权利要求1所述的生根诱导培养，其特征在于：包括，1/4MS+吲哚丁酸IBA 0.05～0.2mg/L+萘乙酸NAA 0.05～0.2mg/L+0.5％琼脂。

7.根据权利要求6所述的生根诱导培养，其特征在于：包括，1/4MS+吲哚丁酸IBA 0.2mg/L+萘乙酸NAA 0.2mg/L+0.5％琼脂。