[发明专利]一种长链非编码RNA lncRNA-BcrAR及其在抗细胞癌变中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种非编码RNA及其应用，具体涉及一种长链非编码RNA lncRNA-BcrAR及其在抗细胞癌变中的应用。

背景技术

Abl是一类可诱导包括淋巴细胞在内的多种细胞恶性转化的重要癌基因，包括v-Abl、Bcr-Abl和Tel-Abl等。v-Abl是Abelson鼠白血病病毒(Abelson murine leukemia virus，简称A-MuLV)的致癌基因。A-MuLV主要诱导鼠淋巴细胞恶性转化，从而引发小鼠急性淋巴瘤的产生。Bcr-Abl是由于人类细胞染色体易位使Bcr与c-Abl的C端接合而形成的融合基因，其表达产物为融合癌蛋白。Bcr-Abl是诱发人类慢性髓性白血病(Chronic Myelogenous Leukemia, CML)最关键的癌基因，也可引起人淋巴细胞恶性转化。尽管进行了多年研究，但是关于Abl诱导细胞癌变的分子机制仍不完全清楚。

长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)是转录组的一个重要组成部分，在细胞生命活动中发挥着重要而广泛的作用,近年来受到高度重视。随着对长链非编码RNA研究的深入，发现越来越多的长链非编码RNA与肿瘤的发生、发展密切相关。但是，对于Abl的作用机理，当前大多集中在研究Abl癌基因与诸多蛋白编码基因的相互调控上。关于长链非编码RNA在Abl介导的细胞癌变过程中的作用，以及长链非编码RNA在抗Abl诱导的白血病中的应用，目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种长链非编码RNA lncRNA-BcrAR，以及lncRNA-BcrAR在抗细胞癌变中的应用。本发明所述长链非编码RNA lncRNA-BcrAR，其转录本序列如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，是与人类慢性髓性白血病发生相关的长链非编码RNA。

实现本发明目的的技术方案如下：使用长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）芯片检测K562细胞中lncRNA的表达情况，人为干扰K562细胞中的Bcr-Abl基因后，lncRNA-BcrAR的表达明显上调，提示lncRNA-BcrAR可能参与到Bcr-Abl诱导的细胞恶性转化过程。提取K562细胞总RNA，反转录合成cDNA，设计lncRNA-BcrAR PCR扩增用引物，进行PCR扩增，首次克隆得到lncRNA-BcrAR基因。构建lncRNA-BcrAR过表达的Bcr-Abl或者v-Abl转化的白血病细胞系（分别为K562和BC44细胞），研究lncRNA-BcrAR在Abl介导的细胞癌变中的作用，以及lncRNA-BcrAR在抗Abl诱导的白血病中的应用。

本发明的一种长链非编码RNA lncRNA-BcrAR，其转录本序列为序列表中SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；重组质粒pMSCV-lncRNA-BcrAR，含有所述lncRNA-BcrAR的核苷酸序列；质粒pSIH-Bcr-Abl shRNA含有核苷酸序列1和核苷酸序列2；

所述核苷酸序列1：

5’-GATCCGCAGAGTTCAAAAGCCCTTcttcctgtcagaAAGGGCTTTTGAACTCTGCtttttg-3’；

所述核苷酸序列2：

5’-AATTCAAAAAGCAGAGTTCAAAAGCCCTTTCTGACAGGAAGAAGGGCTTTTGAACTCTGCG-3’。本发明还保护所述长链非编码RNA lncRNA-BcrAR在抗细胞癌变中的应用。

本发明的优点：

本发明的lncRNA-BcrAR在人类慢性髓性白血病细胞系K562中呈现低水平表达，在Bcr-Abl介导的细胞恶性转化及肿瘤形成过程中发挥重要作用。人为过表达K562细胞中的lncRNA-BcrAR，能够明显促进细胞走向Imatinib（Abl阳性白血病患者治疗药物）诱导的细胞凋亡，并且显著抑制K562白血病细胞在裸鼠体内诱导的肿瘤生长。另外，lncRNA-BcrAR在v-Abl介导的细胞转化中也发挥重要作用。在A-MuLV转化的小鼠白血病细胞BC44中，lncRNA-BcrAR的过表达，能够明显促进细胞走向Imatinib诱导的细胞凋亡，表明lncRNA-BcrAR在抗Abl诱导的细胞癌变中发挥重要作用，为Abl阳性白血病的诊疗提供新的分子标记和药物靶点。

附图说明