[发明专利]体液中细胞成分的解离

说明书

本申请是申请号为200980129078.0、申请日为2009年7月23日、发明名称为“体液中细胞成分的解离”的中国发明专利申请的分案申请。

【技术领域】

本发明指通过在提供细胞成分的基本上定量解离而基本上无流体成分的沉积，沉淀，变性，凝集及胶凝发生的条件下快速冷冻/解冻处理来处理包括细胞成分的生物流体的方法及装置。方法对于制备用于分析物检测的生物样品特别有用。

【背景技术】

已在各种研究中研究血细胞的冷冻及溶血效应。Scheiwe等人（Cryobiology19,1982,p.461-477）研究了以不同线性冷却速度用或不用冷冻保护剂羟乙基淀粉（HES）降至-196℃的小的玻璃毛细管中分离的及浓缩的红细胞的悬浮液的冷冻。从作为冷却速度的函数的溶血的U-形曲线得出，对于例如0.6的血细胞比容（Hct），及在缺乏HES的情况下，必需用大致100℃/分钟的冷却速度处理细胞悬浮液，以便实现100%溶血。具有更低的分别0.4和0.2的Hct的红细胞悬浮液，在这些条件下产生80～90%溶血。在HES的存在下可实现50～60%的溶血率。大致5000℃/分钟的冷却速度显示大致40%溶血。

Rapatz及Luyet以保存人红细胞的方式研究了冷冻温度，冷冻速度或保护试剂（例如冷冻保护剂）对全血样品的效应（Cryobiology4,1968,pp.215-222）。相应实验已在具有1.5+/-0.5mm外径及0.3+/-0.5mm的壁厚度的玻璃毛细管中进行。在另一出版物中，作者研究了血的快速冷冻后几种动物物种中的溶血（J.Cell.Physiol.77,1970,pp.373-376）。对红细胞溶血的新近结果也在综述A review on basic researches on the cryopreservation of red blood cells中总结（Luyet and Rapatz,Cryobiology6,1970,pp.425-482）。

但是，无出版物应对全血样品的冷冻给出线索，有关如何获得来自包括细胞成分的生物样品的经处理的流体，从而将含于生物样品的基本上全部细胞成分定量解离，然而基本上无流体成分的沉积，沉淀，变性，凝集及胶凝发生。也无在分析中使用经处理的全血的导向。

在来自生物流体的样品中的分析物的测定常要求复杂的及繁琐的预处理过程，以便去除来自流体样品的细胞成分。别的细胞成分或沉积物将阻塞样品注射装置，毛细管，分离柱等。例如，全血含成分，即红细胞，白细胞及血小板。为测定血样品中的分析物，这些细胞成分常必需通过预处理过程（例如离心，过滤或沉积）除去。

关于代表主要血级分的红细胞，样品预处理涉及使用（生物）化学试剂，渗透压休克（即通过低-或高渗溶液）和/或机械处理溶血。但是，溶血产生由血浆及所谓的源于红细胞的血影组成的裂解产物。这些血影耗尽了血红蛋白及仍具有天然的红细胞的尺寸。这意味着，也必需在分析之前通过离心，过滤或沉积除去血影。

但是，这些过程常难以整合进自动化的测试形式。尤其是在靶分析物存在于细胞成分的胞质溶胶或膜的情况中，例如红细胞中的免疫-抑制药物。此情况中，将细胞成分在添加裂解试剂之前通过离心和/或过滤分离富含，或通过将变性剂（例如ZnSO₄及乙腈的混合物）添加到原样品来将它们变性，然后离心。

刚刚提议用于处理用于分析物测定的生物流体的新方法。此方法基于热处理，及适宜于自动化的过程（WO2008/003451）。但是，此方法强烈依赖于小的温度范围的温度，从而需要复杂的温度控制。处理也被t_max，发生凝固的温度限制。此外，添加有机修饰物（例如甲醇）影响加热处理从而处理参数。而且，非每含于生物流体的分析物在推荐的热处理期间稳定。因此，如果要测定热不稳定的分析物，此方法不太优选。

【发明概述】

由此，本发明的课题是提供在以下条件下包括细胞成分的生物流体的新处理方法：

（i）提供所述细胞成分的基本上定量解离，

（ii）不导致流体成分的实质性沉积，沉淀，变性，凝集及胶凝，

（iii）不局限于小的温度范围，及

（iv）允许添加其他不影响处理的流体，例如甲醇等。

以上问题的解决通过提供权利要求中表征的实施方式来实现。

根据本发明的第一方面，提供在以下条件下产生经处理的生物流体的方法：

（i）提供所述细胞成分的基本上定量解离，及

（ii）不导致流体成分的实质性沉积，沉淀，变性，凝集及胶凝，