[发明专利]鹿牛羊马驴猪动物皮组织DNA的PCR鉴定用引物体系

权利要求书

1.一种鹿牛羊马驴猪动物皮组织DNA的PCR鉴定用引物，其特征在于：由下列引物对组成： 

（1）对鹿12S rRNA基因进行扩增生成鹿特异性扩增片段的引物对Ⅰ： 

正向引物：5’-GCCTTCCTATTGACCCTTAATAG-3’ 

反向引物：5’-AGCGGCTGTAAAGTTACTTTCGT-3’； 

（2）对牛Cytb基因进行扩增生成牛特异性扩增片段的引物对Ⅱ： 

正向引物：5’-CCCTCTTACTAATTCTAGCTCT-3’ 

反向引物：5’-GTCCGATGGTGATATATGGGTG-3’； 

（3）对羊Cytb基因进行扩增生成羊特异性扩增片段的引物对Ⅲ： 

正向引物：5’-CGCCATGCTACTAATTCTTGTTCT-3’ 

反向引物：5’-TGGAGGAAGGGTACAAGTACTAAG-3’； 

（4）对马16S rRNA基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对Ⅳ： 

正向引物：5’-TCAAGCTCAACGACACATCTAT-3’ 

反向引物：5’-CCTGAAGGTTAAGGTTTGTGT-3’； 

（5）对驴16S rRNA基因进行扩增生成驴特异性扩增片段的引物对Ⅴ： 

正向引物：5’-TTCAAGCTCAACGTCACACATA-3’ 

反向引物：5’-TGTGTTGGGTTAACAATAGTCT-3’； 

（6）对猪16S rRNA基因进行扩增生成猪特异性扩增片 段的引物对Ⅵ： 

正向引物：5’-CGTTAAAGCTCAACAAATTCACC-3’ 

反向引物：5’-CCCTTTGTGGTTGAGTTGTTTAA-3’。 

2.基于权利要求1所述鹿牛羊马驴猪动物皮组织DNA的PCR鉴定用引物的鉴定方法，其特征在于：以样品总DNA为模板，利用所述引物对Ⅰ、引物对Ⅱ、引物对Ⅲ、引物对Ⅳ、引物对Ⅴ和引物对Ⅵ分别进行PCR扩增实验，反应结束后根据琼脂糖凝胶电泳判定结果；所述样品总DNA模板来自鹿、牛、羊、马、驴和猪物种动物皮组织的混合，或上述各物种动物皮组织产品中的一种。 

3.根据权利要求2所述鹿牛羊马驴猪动物皮组织DNA的PCR鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中的特定PCR反应体系包括下列组分：双蒸水4.9体积份、10×PCR反应缓冲液1体积份、2mM each的dNTPs1体积份、2.5U/μL的热启动高效Taq酶0.1体积份、经稀释1000倍的总DNA模板1体积份、2μM正向引物1体积份和2μM反向引物1体积份。 

4.根据权利要求3所述鹿牛羊马驴猪动物皮组织DNA的PCR鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中的特定PCR反应体系包括下列组分：双蒸水4.9μL、10×PCR反应缓冲液1μL、2mM each的dNTPs1μL、2.5U/μL的热启动高效Taq酶0.1μL、经稀释1000倍的总DNA模板1μL、2μM正向引物1μL和2μM反向引物1μL。 

5.根据权利要求2所述鹿牛羊马驴猪动物皮组织DNA的PCR鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中特定PCR反应程序为：依次进行94℃下预变性3min，94℃变性30s， 63℃退火30s，72℃延伸45s，进行40次循环，72℃下延伸10min，最后在4℃下保持1min后结束。 

6.根据权利要求2至5中任一权利要求所述鹿牛羊马驴猪动物皮组织DNA的PCR鉴定方法，其特征在于：所述琼脂糖凝胶电泳结束后判定结果时，判定依据为所述引物对Ⅰ、引物对Ⅱ、引物对Ⅲ、引物对Ⅳ、引物对Ⅴ和引物对Ⅵ分别扩增出的DNA片段大小；其中 

鹿物种的引物对Ⅰ扩增出的DNA片段大小为376bp； 

牛物种的引物对Ⅱ扩增出的DNA片段大小为360bp； 

羊物种的引物对Ⅲ扩增出的DNA片段大小为231bp； 

马物种的引物对Ⅳ扩增出的DNA片段大小为586bp； 

驴物种的引物对Ⅴ扩增出的DNA片段大小为232bp； 

猪物种的引物对Ⅵ扩增出的DNA片段大小为577bp。