[发明专利]基于S-层蛋白体外自组装的多功能生物纳米材料

权利要求书

1.一种多功能新型生物纳米材料，其特征是一种基于S-层蛋白体外自组装的多功能新型生物纳米材料，该材料由包括以下步骤的方法获得：

（1）重组载体PQE30-MPH和PQE30-EA1-MPH的制备：

扩增甲基对硫磷水解酶MPH基因和炭疽芽孢杆菌S-层蛋白EA1基因，并克隆至商业化载体PQE30中，分别获得重组载体PQE30-MPH和PQE30-EA1-MPH。

所述MPH基因的扩增引物是：

5’-ATATCTGCAGGCCGCACCGCAGGTG-3’，

5’-GTGAAGCTTTTACTTGGGGTTGACGAC-3’；

所述EA1基因的扩增引物是：

5’-TGTAGGATCCGCAGGTAAATCATTC-3’，

5’-GCCGAGCTCTAGATTTGGGTTATTA-3’；

（2）融合蛋白的制备：

将重组载体PQE30-EA1-MPH通过常规CaCl₂转化法转化至大肠杆菌Escherichia coli M15中，表达、纯化融合蛋白：挑取单克隆于5ml双抗性LB培养基中，37℃过夜培养16～20h，按1%的接种量转接于双抗性LB培养基中，37℃培养至OD值为0.6～0.8，此时加入1mM的IPTG诱导目的蛋白质的表达，表达条件为28℃，4～5h。表达后的菌体6000rpm，4℃收集，超声破碎，用镍柱亲和纯化目的蛋白，并用BCA试剂盒测浓度；所述双抗性LB培养基由胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，100μg/ml氨苄青霉素和50μg/ml卡那霉素组成。

（3）体外组装多功能新型生物纳米材料：

将上述融合蛋白EA1-MPH30～100μg/ml置于pH9.0的组装缓冲液中，该组装缓冲液为10mM CaCl₂﹑0.5mM Tris-HCl，室温过夜组装；电镜观察，确定其形成具有规则晶格结构的纳米膜，该纳米膜为所述多功能新型生物纳米材料。

2.根据权利要求1所述的多功能新型生物纳米材料，其特征是：具有P1对称晶格的膜状结构。

3.根据权利要求1所述的多功能新型生物纳米材料，其特征是：用于有机磷农药降解。

4.根据权利要求1所述的多功能新型生物纳米材料，其特征是：能够稳定甲基对硫磷水解酶的活力，用于酶的长时间贮存。

5.根据权利要求1所述的多功能新型生物纳米材料，其特征是：具有胞壁质水解酶活性，用于抑制溶壁微球菌。

6.根据权利要求1所述的多功能新型生物纳米材料，其特征是：作为炭疽芽孢杆菌抗体检测的超灵敏元件。

7.根据权利要求6所述的多功能新型生物纳米材料，其特征是所述超灵敏元件为：自组装后的多功能新型生物纳米材料。