[发明专利](7S)‑3,4‑二甲氧基双环并[4.2.0]辛‑1,3,5‑三烯‑7‑甲酸的酶合成方法以及在伊伐布雷定及其盐的合成中的应用

权利要求书

1.合成光学纯的式(I)化合物的方法：

该方法采用在另一种具有活性的生物学系统的微生物中过度表达的玫瑰色红球菌NCIMB11216的腈水解酶通过外消旋的或非光学纯的式(IV)的腈的对映选择性酶水解进行：

该反应在有机溶剂和pH为5－10的水溶液的混合物中进行，

每升溶剂混合物中式(IV)的腈的浓度为1－500g，

E/S的比例为1/1－1/100，

反应温度为25℃－40℃。

2.权利要求1的方法，其中所述具有活性的生物学系统的微生物为包含重排质粒的细菌。

3.权利要求2的方法，其中所述过度表达腈水解酶的细菌以细菌浆液或冻干物的形式直接使用。

4.权利要求1－3中任一项的方法，其中所述有机溶剂选自二甲基亚砜、DMF、丙酮、乙腈、乙醇、异丙醇、THF和MTBE。

5.权利要求1－4中任一项的方法，其中所述作为反应副产物的构型为(R)的腈：

通过碱的作用进行外消旋化而形成外消旋的式(IV)的腈从而再循环进入酶水解过程。

6.权利要求5的合成方法，其中所述碱为DBU。

7.权利要求5或权利要求6的合成方法，其中所述外消旋化步骤在位进行。

8.权利要求5－7中任一项的方法，其中所述式(I)的酸在一或多个酶水解循环后分离。

9.合成式(III)化合物的方法：

采用式(IV)的腈作为原料：

将其水解形成光学纯的权利要求1－8中任一项的式(I)的酸：

然后将其转化为光学纯的式(XI)的酰胺：

将其还原获得式(III)化合物。

10.权利要求9的合成方法，其中所述将式(XI)化合物还原形成式(III)化合物的反应通过BH₃、NaBH₄或LiAlH₄进行。

11.权利要求9或权利要求10的合成方法，其中将式(III)化合物随后与式(XII)化合物偶合：

其中X代表卤素原子，

或者，在还原剂存在下，将其用式(XIII)化合物进行还原胺化反应：

其中R₂代表选自CHO和CHR₃R₄的基团，

其中R₃和R₄每一个均代表直链或支链(C₁-C₆)烷氧基，或者与携带它们的碳一起形成1,3-二氧六环、1,3-二氧戊环或1,3-二氧庚环，

获得伊伐布雷定，然后将其转化为药学上可接受的酸的加成盐，为无水或水合物形式。

12.权利要求11的合成方法，其中X为碘原子。

13.权利要求11的合成方法，其中式(III)化合物以其盐酸盐的形式用于还原胺化反应，获得为盐酸盐形式的伊伐布雷定。

14.权利要求10或权利要求13的合成方法，其中所述用式(XIII)化合物进行的还原胺化反应在钯炭催化的氢气环境中进行。