[发明专利]一种小鼠肠道菌群失调ERIC-PCR指纹图谱的制备方法无效
| 申请号： | 201410055356.5 | 申请日： | 2014-02-19 |
| 公开（公告）号： | CN103773887A | 公开（公告）日： | 2014-05-07 |
| 发明（设计）人： | 伦永志;孙丽妲 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 大连智慧专利事务所 21215 | 代理人： | 周志舰 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 小鼠 肠道 失调 eric pcr 指纹 图谱 制备 方法 | ||
1.一种小鼠肠道菌群失调ERIC-PCR指纹图谱的制备方法，其特征在于：
(1)从盲肠内容物标本中提取基因组DNA；
(2)所提取的盲肠内容物DNA须用柱式腐殖酸清除剂清除腐殖酸，从而得到纯化的DNA溶液；
(3)采用合成引物ERIC1R、ERIC2，取纯化的DNA溶液作为PCR模板，PCR抑制物清除剂加入到PCR反应体系中，进行PCR扩增；取扩增产物用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上样，电泳结束后凝胶采用Syber-GreenⅠ染色，并立即进行紫外拍照，即得小鼠肠道菌群失调ERIC-PCR指纹图谱；所述ERIC1R引物的序列为5’-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3’，所述ERIC2引物的序列为5’-AGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3’；所述PCR抑制物清除剂加入量与PCR总反应体系总量的体积比1：10。
2.如权利要求1所述小鼠肠道菌群失调ERIC-PCR指纹图谱的制备方法，其特征在于：所述非变性聚丙烯酰胺凝胶为以30%聚丙烯酰胺、5×TBE为原料，10%APS作为促凝剂，TEMED作为催化促凝剂。
3.如权利要求1所述小鼠肠道菌群失调ERIC-PCR指纹图谱的制备方法，其特征在于：所述PCR扩增，扩增程序为：95℃预变性7min，94℃变性1min，52℃退火1min，65℃延伸8min，循环35次，65℃延伸16min。
4.权利要求1所述小鼠肠道菌群失调ERIC-PCR指纹图谱的制备方法在小鼠肠道菌群失调快速鉴别的应用。
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