[发明专利]一种桑枝皮中血管紧张素转换酶抑制剂的分离纯化法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种活性物质的分离方法，具体地讲是涉及一种提取分离桑枝皮中降血压活性物质（ACE）的方法。

背景技术：

桑枝白皮是一味传统的中药材，含有多种活性成分，如黄酮类，多糖和生物碱类等。研究表明，桑枝提取物对人体具有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血糖、降血脂和镇痛等作用。吴志平等（2005）在《蚕业科学》报道桑枝的降血糖功效优于常用的桑白皮和桑叶。邢冬杰等（2010，中国实用医药）和刘先明等（2011，蚕业科学）研究表明桑枝提取物能显著降低血浆甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、全血黏度、血浆黏度的水平，使血脂、血液流变学指标得到改善。马永雷等（2010，蚕业科学）报道了桑枝皮醇提物具有抗氧化作用并可以抑制α-糖苷酶活性，具有降血糖和抗肿瘤等生物活性。目前，相关发明专利有：桑枝生物碱有效部位在制备降血糖药物中的应用（ZL200610111644.3），桑枝黄酮和二苯乙烯类提取物在预防或治疗高尿酸血症和痛风中的应用（ZL200910095836.3），中草药桑枝独活南红花治疗脊髓灰质炎后遗症的新用途（ZL200810189854.3）,一种桑枝皮中各组分的提取和分离方法(ZL201110041431.9)，桑叶和/或桑枝提取物的制备方法及所得产品和应用(ZL201010261582.0),桑枝皮中具有抑制α-糖苷酶活性的水溶性生物碱纯化方法及应用(ZL201210118472.8)，缓解类风湿性关节炎桑枝生地中药口服液及制备方法(ZL201210182097.3),一种桑枝皮果胶的高效提取方法(ZL201210187112.3)，等等。

然而，迄今尚未见有关桑枝皮ACE抑制剂提取工艺的报道，以桑枝皮为原料开发无毒副作用的降血压物质，将为高血压患者提供更多的治疗手段。

发明内容：

本发明的目的是提供一种桑枝皮中ACE抑制剂的分离纯化的方法，具有较高得率，所得ACE抑制剂纯度高。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种桑枝皮中ACE抑制剂的分离纯化的方法，步骤如下：

（1）桑枝皮剥离及粉碎处理：

将桑枝皮与其本质部分离，桑枝皮自然晾干或50℃烘干，粉碎过20-30目筛；

（2）桑枝皮中ACE抑制剂有效成分的提取：

称取粉碎过筛后的桑枝皮，加水，配制成浓度为6-8%的桑枝皮悬浮液，加纤维素酶3200-3800U/g，调节pH为4.5-5.0，超声波细胞破壁浸提、分离60-70min，过滤，调节提取液pH值6.5-7.5，在5000r/min条件下离心15-20min，分离上清液，即得桑枝皮提取液。

（3）离子交换柱层析：

将桑枝皮浸提液上阴离子树脂201×7交换柱层析；分别用水和NH₄OH洗脱；收集ACE抑制剂含量最高的洗脱液。

（4）分子筛层析：

选用葡聚糖凝胶G-25，根据洗脱成分分子量的大小进一步分离样品，用等2-3倍柱体积的蒸馏水洗脱，收集ACE抑制率最高的洗脱液，冷冻干燥，保存备用。

本发明的桑枝皮中ACE抑制剂的分离纯化方法的优点和有益效果：

1.以桑树枝条为原料，易于获得，原料来源丰富；同时深加工桑枝条，有利于废物再利用，减少对环境的污染。

2.经纤维素酶提取、阴离子树脂201×7层析、葡聚糖凝胶G-25分子筛再纯化等步骤，最终可获得对ACE抑制率达87%以上原料粉，纯度达73%。

附图说明

图1为实施例1所提取的ACE抑制剂的谱图。

具体实施方式

实施例1

一种桑枝皮中ACE抑制剂的分离纯化的方法，步骤如下：

1.原料处理：取新鲜桑枝，剥皮，洗净，50℃烘干，粉碎过20-30目筛备用。

2.桑枝皮ACE抑制剂有效成分的提取：

称取粉碎后的桑枝皮粉末，加水，配制成质量浓度为6-8%的桑枝皮悬浮液，加纤维素酶3200-3800U/g，调节pH为4.5-5.0，经超声（功率80-90W），提取60-70min，过滤，提取液pH值调节在6.5-7.5范围，在5000r/min条件下离心15-20min，分离上清液，即得桑枝皮提取液。

3.树脂分离纯化：