[发明专利]叶酸-葡聚糖缀合物及其应用

权利要求书

1.叶酸-葡聚糖缀合物，其由如下制备方法制备而得，该方法包括，

(1)合成琥珀酰化葡聚糖；

(2)合成胺基化叶酸类似物，所述胺基化叶酸类似物是如下化合物

(3)用步骤(1)和步骤(2)的产物合成叶酸-葡聚糖缀合物。

2.权利要求1所述的叶酸-葡聚糖缀合物，其中所述方法包括，

(1)按流程式I合成琥珀酰化葡聚糖

(2)按流程式II合成胺基化叶酸类似物

(3)按流程式III用步骤(1)和步骤(2)的产物合成叶酸-葡聚糖缀合物

3.权利要求1所述的叶酸-葡聚糖缀合物，其中所述方法包括，

(1)取平均分子量20KDa、Mw/Mn＝1.3的葡聚糖10.0g溶于无水DMF中，搅拌20分钟形成澄清的溶液，然后加入1670mg琥珀酸酐和200.0mg4-二甲基氨基吡啶(DMAP)，快速搅拌至所有的固体溶解；置于室温下使得整个反应液反应24小时，之后将反应液放入截留分子量3,500的Spectra/Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后将透析袋中的溶液冷冻干燥，得到白色的琥珀酰化葡聚糖；

(2)取3g叶酸溶于120mL DMSO中，向其中加入930mg DCC和770mgNHS，反应液在室温暗室处放置12小时，然后副产物DCU沉淀被过滤去除，再向反应液加入1000mL V∶V＝30∶70的丙酮/乙醚混合液并进行搅拌，收集黄色沉淀并用V∶V＝30∶70的丙酮/乙醚混合液洗涤后晾干；取2.78g晾干的黄色沉淀再溶于20mLDMSO中，取6.01g乙二胺快速加入到该溶液中，将两者混合后在室温暗室处放置12小时，加入50mL V∶V＝30∶70的丙酮/乙醚混合液并进行搅拌，收集黄色沉淀并在DMSO溶液中重结晶提纯，获得胺基化叶酸类似物；

(3)取步骤(1)制备的琥珀酰化葡聚糖2000mg溶于40m1无水DMF中，加入50mg DMAP和579.7mg DCC，在室温下放置12小时后，再加入2mL含300mg步骤(2)制备的胺基化叶酸类似物的EDC溶液，反应液在室温下搅拌12小时后，将反应液放入截留分子量3,500的Spectra/Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后将透析袋中的溶液冷冻干燥，得到黄色的叶酸-葡聚糖缀合物。

4.权利要求1～3之任一所述的叶酸-葡聚糖缀合物的制备方法，其包括权利要求1～3之任一中所述的制备步骤。

5.权利要求1～3之任一所述的叶酸-葡聚糖缀合物在制备含有脂溶性药物化合物(优选是紫杉醇)的药物组合物(优选是注射剂，更优选是冻干粉针剂)中的应用。

6.权利要求5所述的应用，其中制备的方法包括，

(4)将药物化合物混合(优选用高速匀浆机混合)入含权利要求1～3之任一所述的叶酸-葡聚糖缀合物的溶液中，形成含纳米级颗粒的溶液；和，

(5)任选向步骤(4)的产物加入药学上可接受的辅料(如，甘露醇)和/或进行干燥(如，冷冻干燥)。

7.权利要求6所述的应用，其中制备的方法不包括层析步骤。

8.权利要求6所述的应用，其中药物化合物是脂溶性药物化合物，优选是紫杉醇。

9.权利要求6所述的应用，其中步骤(4)中的纳米级颗粒是粒径小于200nm(优选是小于180nm)的颗粒。

10.权利要求6所述的应用，其中步骤(4)中的药物化合物和叶酸-葡聚糖缀合物的重量比为0.5～2∶1～10，优选为0.8～1.2∶3～6，如1∶4。