[发明专利]一种猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白的制备技术在审
| 申请号： | 201410063007.8 | 申请日： | 2014-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN103937828A | 公开（公告）日： | 2014-07-23 |
| 发明（设计）人： | 王占伟;孙玉贤;武昱孜 | 申请（专利权）人： | 南京洲邦生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K19/00 |
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| 地址： | 210038 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 干扰素 胸腺肽 融合 蛋白 制备 技术 | ||
1.一种猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白的制备技术，其特征在于制备的基本过程如下：根据GenBank已公布的猪干扰素α1（序列号DQ249000）基因序列及胸腺肽α1（序列号770552A）序列，合成扩增引物，融合扩增猪干扰素α1和胸腺肽α1的全基因序列，克隆并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶-干扰素α1-胸腺肽α1融合蛋白，检测鉴定，分离纯化融合蛋白。
2.按权利要求1所述的猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白的制备技术，其特征在于：所述的猪干扰素α1和胸腺肽α1的全基因序列是通过过桥PCR融合扩增的，所述的过桥PCR是通过4条引物实现的，所述引物的序列分别为引物1：5’-CATATGTGCGATCTGCCGCAGACCC-3’；引物2：5’-CGAGCCGCCGCCGCCGCCGCGCGCCGAGCCGCCGCCGCCCAGATTACGGCTGCTGCTAAACGC-3’；引物3：5’-GGCGGCGGCGGCTCGGCGCGCGGCGGCGGCGGCGGCTCGTCGGATGCGGCGGTGGAT-3’； 引物4：5’-CTCGAGTCATTAATTTTCCGCTTCTTCC-3’。
3.按权利要求1所述的猪干扰素α1与胸腺肽融α1合蛋白的制备技术，其特征在于：所述的猪干扰素α1和胸腺肽α1的全基因序列与载体连接克隆表达，所述载体是pMD18-T和pGEX4T。
4.按权利要求1或3所述的猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白的制备技术，其特征在于：所述的猪干扰素α1和胸腺肽α1的全基因序列在LB液体培养基中用IPTG诱导表达，所述IPTG的浓度为0.5~5mmol/L，所述的LB液体培养基含Ampr。
5.按权利要求1所述的猪干扰素α1与胸腺肽融α1合蛋白的制备技术，其特征在于：所述的检测鉴定中使用的二抗是HRP-羊抗鼠IgG。
6.按权利要求1所述的猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白的制备技术，其特征在于：所述的融合蛋白分离纯化方法采用亲和柱层析法。
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