[发明专利]一种生物素标记的川芎嗪及其制备方法

权利要求书

1.一种生物素标记的川芎嗪及其制备方法，生物素标记的川芎嗪，结构式为：

2.一种生物素标记的川芎嗪及其制备方法，其特征在于：所述生物素标记的川芎嗪的制备方法如下：首先将川芎嗪氧化成2-羟基-3，5，6-三甲基吡嗪，与D-生物素、EDCI，和DMAP按照12∶29∶30∶1的质量比溶解于无水DMF中，60℃条件下搅拌反应72h，TLC监测反应完全，将反应液倒入到30mL的乙醚中，4℃搅拌4h，析出白色沉淀，过滤，乙醚洗涤，粗品经柱层析纯化后得生物素标记的川芎嗪，产率为78％左右。

(1)2-羟基-3，5，6-三甲基吡嗪的合成，即中间体

将6.8g，摩尔浓度为50mmoL的川芎嗪，即物质1、12mL冰醋酸和6mL质量浓度为30％的H₂O₂加入三颈瓶中，于70℃加热反应4h后，补充加入6mL质量浓度为30％H₂O₂，继续回流反应4h。TLC监测反应完全，冷却至室温，25％NaOH溶液调pH值至10，20mL×3CH₂Cl₂提取，合并有机层，用饱和食盐水洗，然后MgSO₄干燥，过滤，蒸除得白色固体物，即中间体2。然后加入20mL醋酐，加热回流2h，TLC监测反应完全，减压蒸除过量醋酐，得黑色浆状物，即中间体3。冷却后加入25％NaOH溶液调pH值至12，20mL×3CH₂Cl₂萃取，无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，所得固体经硅胶柱层析，石油醚(V)∶乙酸乙酯(V)＝6∶1，得淡黄色结晶，2.36g质量浓度为61％的2-羟基-3，5，6-三甲基吡嗪，即中间体4；mp88-89℃；¹H NMR，300MHz，δ4.68(d，J＝2.7Hz，2H)，4.29(s，OH)，2.51(s，6H)，2.41(s，3H).ESI-MS m/z：153[M+H]⁺，175[M+Na]⁺；

(2)生物素标记的川芎嗪，即目标化合物的合成

将48mg，摩尔浓度为0.316mmoL的中间体4，115mg，摩尔浓度为0.471mmoL的D-生物素，120mg，摩尔浓度为0.628mmoL的EDCI，和4mg，摩尔浓度为0.032mmol的DMAP溶解到2.5mL无水DMF中，60℃条件下搅拌反应72h，TLC监测反应完全，将反应液倒入到30mL的乙醚中，4℃搅拌4h，析出白色沉淀，过滤，乙醚洗涤，粗品经柱层析，eluent：20％MeOH/EtOAc，纯化后得93mg，质量浓度为78％白色固体，即生物素标记的川芎嗪终物质5。mp128-129℃；¹HNMR(300MHz)δ6.45(s，1H)，6.38(s，1H)，5.14(s，2H)，4.28-4.32(m，1H)，4.11-4.14(m，1H)，3.09(m，1H)，2.83(dd，J＝12.8Hz，4.9Hz，1H)，2.65(d，J＝14.7Hz，1H)，2.44(s，6H)，2.42(s，3H)，2.36(t，J＝7.4Hz，2H)，1.67-1.59(m，2H)，1.67-1.59(m，2H)，1.57-1.52(m，2H)，1.50-1.47(m，2H)；¹³C NMR(75MHz)δ172.5，162.7，150.7，148.3(2×C)，144.6，64.2，61.0，59.1，55.3，33.1，27.9(3×C)，24.5，21.1，20.9，20.0；ESI-MS m/z：379[M+H]⁺，401[M+Na]⁺，417[M+K]⁺；HRMS(EI⁺)calc.for[C₁₈H₂₆N₄O₃SNa]⁺401.1623，found401.1630。