[发明专利]FGF19通过抑制胆汁酸合成发挥抗炎作用的应用

说明书

技术领域

本发明涉及重组蛋白质药物，具体涉及人重组蛋白FGF19通过抑制肝脏CYP7A1介导的胆汁酸合成发挥抗炎作用的突破性进展。

背景技术

鉴于胆汁酸的促炎活性和致癌活性，体循环中的胆汁酸水平需得到严密的调控以使之保持在生理浓度范围内。正常情况下胆汁酸可以通过作用于相关核受体有效的调节自身的合成和转运，以及胆固醇与脂质代谢的稳态平衡。已有临床试验表明，10％-30％的慢性肠炎(IBD)患者会伴随不同程度的胆汁淤积，总胆汁酸水平与肠道炎症存在相关性。这些实事均说明胆汁酸蓄积在慢性肠炎的发生过程中起到了重要作用。

成纤维细胞生长因子19(FGF19)可以通过抑制肝脏胆汁酸合成限速酶CYP7A1的基因表达调控胆汁酸合成，其基因表达收到核受体FXR的直接调控。小鼠FGF15是人FGF19的同源蛋白，FGF15/19被证实是由回肠上皮细胞分泌，通过肝门静脉血入肝，结合于肝脏表达的异源二聚体受体FGFR4/β—Klotho，激活JNK信号通路从而抑制CYP7A1的表达。已有研究表明，FGFR4、β—Klotho基因敲除小鼠胆汁酸库(Bile acid pool)均显著增加，说明FGF15/19在胆汁酸水平的调控中起重要作用。

基于IBD病人伴随胆汁酸显著蓄积的实验/临床事实，结合FGF19介导的胆汁酸合成负反馈调控的理论基础，我们认为：FXR—FGF15/19介导的胆汁酸合成负反馈机制失灵所引起的胆汁酸蓄积是慢性肠炎进入非可控状态的重要因素和发病机理，FXR—FGF15/19通路有望成为治疗IBD的新切入点，人重组蛋白FGF19通过抑制胆汁酸合成发挥抗炎作用将为IBD的治疗带来重大突破。

发明内容

本发明的目的是提出肠道炎症新的致病机理并阐明FGF19抗炎机制和应用。首先我们通过硫酸葡聚糖钠(DSS)诱导慢性结肠炎小鼠模型，研究小鼠在溃疡性结肠炎状态下，胆汁酸水平是否发生变化，结果发现DSS肠炎小鼠总胆汁酸库增加。根据qRT—PCR实验考察介导胆汁酸合成的酶的mRNA的表达，结果发现，DSS肠炎小鼠肝脏胆汁酸合成限速酶CYP7A1的mRNA表达显著上调，说明胆汁酸合成增加。通过qRT—PCR技术以及免疫组化技术进一步发现，CYP7A1上调是由于介导胆汁酸负反馈的FXR—FGF15通路在肠炎小鼠中受到了显著的抑制。这说明回肠FXR-FGF15通路的抑制诱发了胆汁酸合成的增加，并有可能导致毒性胆汁酸在体内的蓄积以及疾病的进一步恶化。因此，基于这一理论依据，在DSS肠炎模型基础上，给予人重组FGF19恢复负反馈调节作用，结果发现，0.025mg/kg给药剂量的FGF19能抑制肝脏CYP7A1的mRNA水平和蛋白含量、恢复胆汁酸稳态平衡，进一步考察炎症相关病理学指标，证实人重组FGF19可以有效抑制DSS诱导的小鼠肠炎症状。

附图说明

图1：A，DSS诱导小鼠结肠炎症(H&E染色，200倍)及组织学评分。B，DSS肠炎小鼠结肠部位炎症因子I1-6，I1-1β，Tnf-α的mRNA表达增加。*p<0.05，**p<0.01，肠炎组(DSS)与对照组(Control)相比。

图2：A，DSS肠炎小鼠胆汁酸肝脏合成限速酶CYP7A1的mRNA表达和B，蛋白含量增加。C，DSS肠炎小鼠总胆汁酸库增加。*p<0.05，**p<0.01，肠炎组(DSS)与对照组(Control)相比。

图3：A，DSS肠炎小鼠FXR—FGF15负反馈通路相关基因表达受到抑制。B，回肠FXR及FGF15免疫组化。*p<0.05，**p<0.01，肠炎组(DSS)与对照组(Control)相比。

图4：A，人重组FGF19能抑制DSS诱导的小鼠结肠炎。A，病理指标：体重变化、结肠长度。B，H&E染色，200倍。C，结肠部位炎症因子I1-6，I1-1β，I1-10的mRNA表达。*p<0.05，**p<0.01。

图5：人重组FGF19能恢复DSS肠炎状态下负反馈机制。A，肝脏负反馈通路相关基因Fgfr4，β-Klotho，Shp，Fxr的mRNA表达。B，抑制DSS所诱导的CYP7A1的mRNA表达及蛋白含量的增加，使总胆汁酸库恢复到正常水平。*p<0.05，**p<0.01。

具体实施方式

实施例1.DSS诱导慢性结肠炎小鼠模型

实验材料：