[发明专利]一种损伤DNA-纳米金复合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种损伤DNA-纳米金复合物，其特征在于，该损伤DNA-纳米金复合物中，1摩尔的纳米金上结合有7-12摩尔的药物损伤的双链DNA。

2.根据权利要求1所述的损伤DNA-纳米金复合物，其中，所述药物损伤的双链DNA的长度为9-45bp，结合药物的DNA链中间具有1-2个鸟嘌呤。

3.根据权利要求1所述的损伤DNA-纳米金复合物，其中，所述药物为铂类抗肿瘤药物，所述铂类抗肿瘤药物的通式优选为[Pt(Ⅱ)A2X2]，其中，A2为2个单齿氨配体或1个双齿氨配体，更优选为NH₃或NH₂C₂H₄NH₂；X2为2个单齿阴离子配体或一个双齿阴离子配体，更优选地，单齿阴离子配体为Cl。

4.根据权利要求1所述的损伤DNA-纳米金复合物，其中，所述纳米金的平均粒径为10-40nm。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的损伤DNA-纳米金复合物，其中，所述药物损伤的双链DNA与纳米金通过S-Au键相连。

6.制备权利要求1-5中任意一项所述的损伤DNA-纳米金复合物的方法，其特征在于，该方法包括将药物损伤的双链DNA与纳米金接触，以使药物损伤的双链DNA与纳米金相连。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，在接触体系中，药物损伤的双链DNA和纳米金的摩尔比为250-500:1。

8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述接触的方式为：在25-38℃下孵育1-2.5h，加入氯化钠并使氯化钠在接触体系中的终浓度为0.05-0.15M，再于3-5℃下静置10-15h。

9.权利要求6-8中任意一项所述的方法制得的损伤DNA-纳米金复合物。

10.一种捕获药物损伤DNA应答蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）将权利要求1-5和9中任意一项所述的损伤DNA-纳米金复合物、没有被药物损伤的对照DNA-纳米金复合物与细胞裂解液混合，以使损伤DNA-纳米金复合物与药物损伤DNA应答蛋白结合，所述对照DNA-纳米金复合物中，1摩尔的纳米金上结合有7-12摩尔的双链DNA，所述对照DNA-纳米金复合物中的双链DNA与所述损伤DNA-纳米金复合物中的药物损伤的双链DNA的碱基序列相同；

（2）除去未结合的蛋白，从而分离出捕获的蛋白；

（3）鉴定捕获的蛋白；

（4）应用基于稳定同位素标记的定量蛋白质组学方法对捕获的蛋白进行定量比较，排除非特异性的DNA结合蛋白，从而得到特异性识别药物损伤DNA的应答蛋白。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，以纳米金的重量计，所述损伤DNA-纳米金复合物与细胞裂解液中总蛋白的重量比为0.2-0.4:1。

12.权利要求1-5和9中任意一项所述的损伤DNA-纳米金复合物在药物损伤DNA应答蛋白的捕获和/或鉴定中的应用。