[发明专利]一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法有效
| 申请号： | 201410068256.6 | 申请日： | 2014-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN103898147A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 张耀洲;王小飞;谭淑敏;李杰;盖其静 | 申请（专利权）人： | 天津耀宇生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/02 |
| 代理公司： | 宁波市鄞州甬致专利代理事务所(普通合伙) 33228 | 代理人： | 沈亚芳 |
| 地址： | 300457 天津市滨海新区天津开发区洞庭路*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 mnsod 融合 家蚕 核型 多角体 病毒 p10 蛋白 表达 方法 | ||
1.一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）p10基因的扩增；
（2）MnSOD基因的扩增；
（3）将p10基因连接到pET-28a(+)载体，构建重组质粒pET-28a-p10；
（4）将MnSOD基因连接到重组载体pET-28a-p10中p10基因的羧基端，构建重组质粒pET-28a-p10-MnSOD；
（5）转化重组质粒，培养，诱导表达MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（1）中p10基因的扩增具体是指：以pGEX-6p-1-p10重组质粒为模板，以SEQIDNO.4所示为上游引物、SEQIDNO.5所示为下游引物，进行PCR扩增，PCR扩增的具体程序为95℃预变性5min、95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸30s、循环30次、最后72℃延伸10min，回收产物，得到p10基因。
3.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（2）中MnSOD基因的扩增具体是指：以MnSOD基因为模板，以SEQIDNO.6所示为上游引物、SEQIDNO.7所示为下游引物，进行PCR扩增，PCR扩增的具体程序为95℃预变性5min、95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸45s、循环30次、最后72℃延伸10min，回收产物，得到MnSOD基因。
4.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（3）中构建重组质粒pET-28a-p10具体是指：p10基因和pET-28a(+)载体利用NdeⅠ和HindIII同时进行双酶切，将酶切回收的产物用ligationhigh进行连接60min并转化E.coliTG1感受态细胞，挑取单菌落摇菌培养后提取质粒，得到重组质粒pET-28a-p10。
5.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（4）中构建重组质粒pET-28a-p10-MnSOD具体是指：MnSOD基因和pET-28a-p10载体利用HindIII和XhoⅠ同时进行双酶切，将酶切回收的产物用ligationhigh进行连接60min并转化E.coliTG1感受态细胞，挑取单菌落摇菌培养后提取质粒，得到重组质粒pET-28a-p10-MnSOD。
6.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（5）中诱导表达具体是指：将重组质粒pET-28a-p10-MnSOD转化至E.coliBL21中，在含50μg/mL卡那霉素的LB培养基中37℃、220rpm振荡培养至OD600=0.5，加入终浓度为1mM的IPTG，37℃、220rpm诱导表达4h。
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