[发明专利]马里兰烟叶多糖、提取纯化方法及其作为抗氧化剂的应用

说明书

技术领域

本发明属于烟叶产品技术领域，具体涉及一种马里兰烟叶多糖、提取纯化方法及其作为抗氧化剂的应用。

背景技术

近年来，人们已从近五十种植物叶子中成功提取出的多糖并广泛应用于功能食品和医药的开发研究中，如从桑叶、银杏叶、茶叶、枸杞叶、荷叶、沙棘叶等。从植物叶子中提取的多糖具有非常重要的生物活性。近来随着分子生物学的发展，人们逐渐认识到多糖与蛋白质、核酸一样，是与生命活动紧密相关的生物大分子，具有降血糖、抗肿瘤、抗病毒、提高免疫能力等功能，是药理学研究的热点。

近年来，对植物叶多糖的体外抗氧化活性研究不胜枚举，例如Yuanfeng Wang等通过研究指出：茶叶多糖对·OH自由基的清除效果较明显，而且纯化的茶叶多糖组分TPS1具有较高的清除DPPH自由基活性和抑制脂质过氧化的作用。陈义勇等人的研究结果表明：银杏叶多糖清除DPPH自由基和·OH自由基的能力也较强。植物叶子多糖的提取方法有很多，主要包括溶剂提取法、超声辅助提取法、微波辅助提取法以及酶解法等。刘树兴等人利用热水浸提法从桑叶中提取桑叶多糖；利用正交试验确定多糖提取的最佳条件，用苯酚-硫酸法测定多糖的含量，通过三氯乙酸法除去多糖中的蛋白质。张凡等对超声波提取法与水提醇沉法提取枸杞叶多糖进行了比较，在样品粒度、提取时间、提取温度、液料比以及提取次数一致的前提下，超声波法与水提法的提取率分别为12.35%、10.28%，可以看出，超声波法提取效果更好。

烟草是一种有争议、但有巨大经济效益的农作物，也是世界上种植最广泛的非粮食作物，烟草种植与产品加工在国民经济发展中发挥着重要的作用。我国引种烟草很早，产量颇大。到目前为止我国烟草的种植面积和产量均居世界首位。我国目前对于烟叶的研究多限于香烟的加工工艺。但由于烟叶中含有多种特殊天然植物素，如烟碱、果胶、纤维素、烟酸、茄尼醇、多糖等，所以在精细化工、日化、香精香料、食品、轻工、医药等行业都有着广泛的应用，极具开发潜质。烟叶多糖作为烟叶功能成分中的一种生物活性物质，具有多种药理作用，其应用和开发前景非常广阔。

马里兰烟属红花烟草，是一种淡色晾烟，口感适中，具有“低烟碱、低焦油”的特点，是生产安全性卷烟的优质原料之一，是斗烟、嚼烟、鼻烟和卷烟的原料，国内常用作混合型卷烟、雪茄烟配方中的调味原料。随着混合型卷烟的发展，我国近几年已引进马里兰烟试种，湖北等地已有少量生产。目前，高纯度烟叶多糖的制备在实验室里已经可以实现，通过对不同类型烟草中烟叶多糖提取及其结构性质的研究，对比分析不同类型烟叶多糖的药理作用，利于提高烟叶的利用价值，为烟草的综合利用提供了一条新的途径。目前，尚未有关于马里兰烟叶多糖的研究和相关报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种马里兰烟叶多糖、提取纯化方法及其作为抗氧化剂的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种马里兰烟叶多糖的提取纯化方法，其由下述步骤获得：

将粉碎过的马里兰烟叶按料液比1:30－40（质量体积比g:ml）加入蒸馏水后，于50－70℃、500±20W超声处理5－7min，然后于4±2℃离心，取上清液旋转蒸发（优选70±5℃）后醇析静置，离心取沉淀，采用Sevage法脱除蛋白，脱色后再次醇析静置并离心取沉淀，冷冻干燥，得粗多糖。

进一步地，将粗多糖用层析柱分离纯化后，获得精制多糖。

具体的，所用层析柱的填料为Sepharose CL-6B；洗脱液为0.2 mol/L NaCl。

利用上述提取纯化方法制备得到的马里兰烟叶多糖。

利用上述提取纯化方法制备得到的马里兰烟叶多糖作为抗氧化剂的应用。

Sevage法脱除蛋白采用本领域常规技术即可。醇析静置时优选使用无水乙醇进行醇析。

本申请采用超声波法提取马里兰烟叶多糖，并通过五水平的单因素实验，研究功率A、时间B、液料比C三个因素对烟叶多糖提取率的影响。然后采用DX8Trial进行响应面试验设计，得出马里兰烟叶多糖的最佳超声提取条件：功率500W、时间6min、料液比1:35。在此工艺条件下，采用紫外可见分光光度计，运用苯酚-硫酸显色法测得马里兰烟叶粗多糖提取得率为2.01%。粗多糖再用层析柱进行分离纯化，得到两个烟叶多糖组分Fr-I和Fr-II。此外，采用邻二氮菲法、DPPH法检测了马里兰烟叶多糖的抗氧化活性，即其对OH·自由基、DPPH·自由基的清除能力。

和现有技术相比，本发明的有益效果：