[发明专利]一种测定新橙皮苷二氢查尔酮含量的高效液相色谱方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定新橙皮苷二氢查尔酮含量的高效液相色谱方法。 

背景技术

普通食糖如蔗糖、甜菜糖是人们日常生活中最广泛使用的调味品，但是它们易使身体发胖，牙齿蛀牙，尤其被糖尿病人所忌讳。随着生活质量的提高，人们越来越关注健康问题，于是各种健康的低热量，高甜度调味品出现了，二氢查尔酮化合物就是其中一类。

二氢查尔酮类化合物是天然存在于自然界的物质，具有许多生理和药理活性，如用于治疗糖尿病。有些二氢查尔酮类化合物本身具有甜味，可用作食品添加剂，如新橙皮苷二氢查尔酮。经过人们的研究，目前已经发现多种二氢查尔酮配糖物都具有非常高的甜度，通常相当于蔗糖甜度的100~1000倍，且具有无毒性，无热量或低热量，是理想的食品调味剂。

新橙皮苷二氢查尔酮是从天然柑橘植物中提取得到的新橙皮苷经氢化而成的新型甜味剂，具有甜度高、热量少、无毒等特点，主要用于甜味剂和屏味剂，广泛应用于食品、医药以及饲料工业中。目前新橙皮苷二氢查尔酮的安全性已经在世界范围内得到认可，已有包括美国、中国、日本在内的30多个国家批准其作为食品添加剂使用。在国内，对新橙皮苷或二氢查尔酮类化合物的的含量测定方法已有很多报道。

徐海燕等（HPLC同时测定胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量，徐海燕，金艺，张红霞，赵怀清，中成药，2010，（8）：1355~1357）报道了一种检测胃力片中新橙皮苷含量的方法。采用了C₁₈（200mmx4.6mm，5μm）色谱柱，乙腈-1%冰醋酸溶液（19:81，v/v），流速为1.0ml/min，检测波长为283nm，新橙皮苷在10.2~102.0μg/ml浓度范围内呈良好线性关系，线性相关系数为0.9993，平均回收率97.1%。

杨武亮（RP-HPLC法测定枳壳中柚皮苷和新橙皮苷的含量，杨武亮，杨世林，张敏，黄加龙，中药新药与临床医药，2005,，16（4）：261~2635）报道了一种检测枳壳中新橙皮苷含量的方法。用了C₁₈（200mmx4.6mm，5μm）色谱柱，乙腈-磷酸水（pH=3)(19:81，v/v），流速为1ml/min，检测波长为283nm，新橙皮苷在0.155μg~0.930μg范围内线性关系良好，线性相关系数为0.9991，平均回收率103.12%。

目前，关于检测新橙皮苷含量的方法有很多，但这些检测方法进样量与峰面积线性关系的范围较窄，本发明中进样量与峰面积线性关系中进样量最小能到0.05μg，最大能到5μg，线性关系范围较大。本发明还具有分离效果好，测定准确，灵敏度高，分析简便快速等技术特点，对于准确测定新橙皮苷二氢查尔酮含量具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种简便、分离效果好、精密度和准确性高的新橙皮苷二氢查尔酮含量的检测方法。为达到上述目的，本方法采用了如下技术方案：

（1）色谱条件：

色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物，分别选用Thermo C₁₈柱 (4.6×250mm 5μm)、Thermo C₁₈柱 (4.6×150mm 5μm)和Thermo C₁₈柱 (4.6×100mm 5μm)进行试验，优选Thermo C18柱 (4.6×250mm 5μm)，具有更好的分离效果。

流动相是甲醇-水，乙腈体积分数为40~70%，甲醇优选体积为45%；流速0.6~1.5ml/min；柱温20~40℃，优选柱温为25℃，流速为1ml/min。

本发明使用Agilent-1260高效液相色谱仪，采用紫外检测器，检测波长283nm。

（2）样品处理：

精确称量标准品约50.0mg，放入50ml容量瓶中，加入色谱甲醇适量超声溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.2μm有机滤头过滤。

精确称量相同质量的供试品，放入50ml容量瓶中，加入色谱乙腈适量超声溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.2μm有机滤头过滤。

（3）测定法：

按上述条件，分别对标准品与供试品进行自动进样。用外标法以峰面积计算新橙皮苷二氢查尔酮的含量。

本发明经过精密度试验、线性关系实验、线性范围实验和加样回收实验等试验对方法进行验证，结果表明该方法准确可靠，检测迅速；成本低廉；检测范围大；灵敏度、精确性高。

附图说明

图1为新橙皮苷二氢查尔酮的结构式。

图2为新橙皮苷二氢查尔酮标准品的HPLC检测图谱。