[发明专利]从植物中提取泛素及类泛素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种从植物中提取泛素及类泛素的方法。 

背景技术

泛素功能非常多样，广泛存在于各种生物体内，这种小蛋白参与了各种细胞过程，包括细胞分裂，DNA修复以及细胞程序化死亡，它还可以作为一种负责开放或关闭基因的蛋白质的秒表。泛素的一个最著名的功能就是帮助清理细胞。泛素连接酶能将一串泛素分子连接到无用的蛋白质上，其可激活蛋白酶体复合物，蛋白酶体复合物吞噬蛋白。转录因子在完成基因功能之后，也会被连接上泛素分子而被清除掉，因此泛素可以有效地关闭基因。同时类泛素蛋白(Ubls)作为信号使者控制着多种细胞功能，诸如细胞增殖、凋亡、细胞周期及DNA修复，且泛素在人体自我修复功能系统中扮演着重要的角色。 

自1975年泛素在小牛胰脏中分离出来，目前国内外已对泛素及类泛素作用的机理、纯化、应用作出了大量研究。但对其制造方法的研究很少，目前利用植物提取蛋白的方法中，多数仅仅局限于一般植物的总蛋白的提取，所提取的蛋白质的功能针对性较小，仅局限于补充人体蛋白，所以导致在市场上的竞争力不强。 

发明内容

本发明的目的在于：提供一种从植物中提取泛素及类泛素的方法，该方法能直接提取营养价值高的泛素及类泛素，且工艺简单，操作过程中不引入不安全物质，减少能源消耗；同时综合利用植物。 

为此，本发明的技术方案在于： 

一种从植物中提取泛素及类泛素的方法，包含如下步骤： 

1）将植物根茎、叶、种子或果实经清洗、消毒、洗涤去除消毒剂，得到原料； 

2）对原料进行粉碎，使其满足胶体磨的使用条件； 

3）如果经步骤2）处理后的原料是植物种子，那么先将植物种子置于24～30℃温水中浸泡24～48h，然后将浸泡后的植物种子或未浸泡的植物根茎、叶或果实置于胶体磨中进行研磨，研磨过程中加入pH=7.6～8.0、50～65毫摩尔（mMol）的磷酸盐缓冲液，优选磷酸氢二钠缓冲液或磷酸二氢钠缓冲液，所述缓冲液为所述原料质量的1～5倍，得到植物粗浆液； 

4）将所述植物粗浆液装入储罐，加入酶活大于2000u/g的纤维素酶，所述纤维素酶质量为所述原料质量的0.2～0.5%，搅拌均匀，在28～42℃条件下放置0.5～1.5h，得到粗浆处理液； 

5）将所述粗浆处理液利用胶体磨磨成细度为50～150目的细浆； 

6）将所述细浆利用离心分离，收集上清液得到粗蛋白液； 

7）将所述粗蛋白液通过孔径0.65～1.2μm的微滤膜收集一次滤过液；将所述一次滤过液通过0.22～0.45μm的微滤膜收集二次滤过液；一次、二次过滤是为了除去粗蛋白液中的微粒、细菌；将所述二次滤过液通过截留分子量为14000的超滤膜并收集三次滤过液，将所述三次滤过液通过截留分子量为6000的超滤膜收集截留液，所述截留液即为所述泛素及类泛素。 

还包括步骤8）：将所述泛素及类泛素用截留分子量为6000的超滤膜进行浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液在-18～-22℃进行保存。 

所述植物根茎为木薯、马铃薯、甘薯、山药、芋头、菊芋、半夏、甘露子、萝卜、竹笋、油菜、莲藕、土豆、红薯或荸荠的根茎； 

所述植物叶为桑科、藜科、蓼科、苋科、十字花科、豆科、旋花科、茄科、菊科、葫芦科或雨久花科植物的叶子； 

所述植物种子为杏仁、腰果、榛子、核桃、松子、板栗、白果、开心果、夏威夷果、花生、葵花子、南瓜子、西瓜子，稻米、小麦、玉米或大豆； 

所述植物果实为葡萄、草莓、香蕉、番石榴、木瓜、苹果、梨、柑桔、柿子、山楂、桃、梅、李、杏、龙眼、荔枝、樱桃、枣或芒果。 

本发明以植物的果实、根、茎、叶为主要原料提取泛素及类泛素蛋白，经过粉碎、研磨、离心、超滤等步骤，从植物中提取泛素及类泛素，不仅加工工艺简单，而且操作过程中不引入不安全物质，减少能源消耗。同时提高植物的综合利用加工效益，所提取的泛素及类泛素蛋白更具有经济效益和社会效益及实用价值。 

本发明制备方法的优点是： 

1）工艺简单，不运用有毒不安全和造成污染的方式提取泛素及类泛素，安全无污染，工艺简单，耗能少，生产的泛素及类泛素蛋白的功能性更强，获得的效益高； 

2）植物的种子、根、茎、叶等均可用此工艺生产。副产物主要是淀粉和纤维素，可生产各种淀粉制品和食用纤维素，其产值不亚于主产品，是一项可持续发展的农业产业化技术。 

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的技术方案进行详细描述。