[发明专利]一种建立脾虚水湿不化证动物模型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种建立脾虚水湿不化证动物模型的方法。

背景技术

中医认为脾位于中焦，主运化，统摄血液。脾运化食物和水液，把水谷精微和津液吸收、转运到全身各脏腑，从而维持人体的生命活动，若脾失健运则影响食物的消化和水谷精微的吸收而出现腹胀、消瘦、食欲不振、倦怠、气血衰少，口唇淡白不泽等。《素问》云：“诸湿肿满，皆属于脾”，脾气在水液的升降布散运动中发挥着重要的作用，以维持水液代谢平衡，若脾气运化水液的功能障碍，必然会导致水液在体内停滞，产生水湿痰饮等病理产物，甚至导致水肿，即所谓“脾生湿”，而水湿产生之后，反过来困遏脾气，成为“湿困脾”。外在湿邪侵入机体，困遏脾气，致使脾气不生，影响正常功能发挥。

脾虚水湿不化证是临床常见证型，许多慢性疾病均伴有脾虚水湿不化证，其主要致病因素有外湿和内湿。气候炎热、潮湿，涉水淋雨，久居潮湿之地等可使湿邪入侵导致外湿。《脾胃论》说：“饮食失节，甘肥过度，脾胃乃伤”，“形体劳役则脾病”。恣食生冷，过食肥甘、劳倦忧思等内伤脾胃，脾失健运，水谷运行受阻，津气不布，困阻于中焦，停留体内可聚成内湿，内湿产生，脾失健运，内湿素盛，也易招致外湿入侵。

为进一步深入探讨脾虚水湿不化证本质及探寻其有效治疗中药，很有必要进行脾虚水湿不化证动物模型复制的研究。理想的证型动物模型复制方法要求简单、客观、稳定性及重复性好，病因、表现、疗效等符合中医理论的指导。模型复制时需考虑动物的生物学特性，尽量选择与人生理、代谢、疾病特点相似，符合试验目的的动物。由于动物症状、体征采集的复杂性，故理性的动物模型不仅要求在症状体征上与人相近或相同，更希望用量化的客观指标来准确评价。

目前，还未见有脾虚水湿不化证动物模型的报道。仅见有学者采用单纯外湿或外湿加内湿方法进行脾虚湿阻动物模型复制的报道，其方法是提高动物生活环境中的温度、湿度，制造外湿，采用高脂饮食，游泳、过量饮水等方法损伤脾胃，制造内湿，使动物出现纳呆少饮、体重下降、稀便、毛发粗糙等表现，此类模型还存在以下明显不足之处：第一，模型制造方法的可重复性及稳定性差，缺乏统一的造模标准，不可控制因素太多，客观性和标准性差。第二，造模时间短，一般5～7天。脾虚的形成是一个长期、慢性的过程，如此短的时间不能形成脾虚证型，虽然出现湿阻表现，也只能是一种短期的状态，易于自然恢复，与中医证型有很大的差距。第三，中医认为机体出现困倦乏力、精神萎靡等症状即可为湿，故湿不易判断。上述脾虚湿阻模型主要以食少纳呆、蜷缩、体重下降等一般状况作为评价指标，不具特异性，难以客观化，但若为水湿则即符合中医脾虚时水湿不化的病机，又易于判断。第四，与临床有差距。比如，单纯制造外湿，提高空气的湿度，模拟出脾虚湿阻的症状，但临床上单纯外湿致病的情况较少见，而是与多因素及体质有关。

发明内容

针对以上现有技术的不足，本发明提供了一种脾虚水湿不化证动物模型的复制方法，设计了AIN-76A纯化饲料改良的高脂低蛋白饲料，发明了高脂低蛋白饲料加力竭游泳的方法模拟中医饮食失节、劳倦内伤，并设计专门时序，用4周龄大鼠诱导42天，建立了一种脾虚水湿不化证的模型，并从脾虚和水湿两个方面进行评价，结果表明该方法可成功复制脾虚水湿不化证动物模型，而且该复制方法稳定性、重复性好，简单、客观，符合中医理论的指导。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种建立脾虚水湿不化证动物模型的方法，该方法包括以下步骤：将大鼠置于IVC独立送回风净化笼中，饲以高脂低蛋白饲料，自由进食、饮水，每日力竭游泳，经过40～45天（优选42天）造模时间的培养即得。

其中，所述高脂低蛋白饲料依据该模型特定病因设计，在AIN-76A纯化饲料的基础上减少酪蛋白含量，增加猪油和胆固醇配制而成。其配方及各组分的质量百分比为：氯化胆碱0.2%，蛋氨酸0.3%，淀粉15%，蔗糖47.5%，纤维素5%，酪蛋白7%，玉米油5%，猪油15%，胆固醇0.5%，多矿3.5%，多维1%。

所述力竭游泳的具体方法为：使大鼠在游泳缸中强迫负重游泳，游泳至力竭为止。

所述力竭游泳具体方式为：每日下午大鼠尾部以10%体重负重，放于高60cm、直径100cm的圆桶中游泳，水温20±2℃，水深50cm，使大鼠不能触及圆筒底部，以大鼠入水到游至力竭，鼻尖没入水中10s时停止。

优选的，选用SPF级Wistar大鼠，4周龄，体重150±20g。

造模完成后，进行各项指标检测，如血生化检查、胃肠功能检查、水负荷试验等。