[发明专利]可检测感染弓形虫的标识性mmu-miR-217-5p

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及可检测感染弓形虫的标识性mmu-miR-217-5p。 

背景技术

刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生虫。人类首例报告为1908年，与动物弓形虫病同时发现，全世界约有5～10亿人感染弓形虫病，人类与这种疾病的斗争已进行了一个多世纪，但至今疾病仍在全球肆虐。我国每年约有8～9万名由于弓形虫引起损害的新生儿出生，感染弓形虫的妇女其异常生产率是正常孕妇的3倍，造成畸胎，死胎。WHO和美国CDC已将弓形虫病作为艾滋病的指征性疾病。 

目前认为，从动物和人体所分离出的弓形虫均属于同一个种，由于实际中弓形虫不同分离株的毒力存在差异，一股根据弓形虫感染小鼠后的毒性可将其分为鼠毒力株和鼠无／低毒力株，或根据基因连锁图谱分为三个型(Type I、Type II、TypeIII)。Type I为强毒株，代表虫株RH株为国际标准强毒株，Type II，TypeIII为弱毒株，基因型变异要大得多。人类感染的弓形虫虫株大多数属于Type II基因型，比较常见的有ME49株等。因此，目前对于弓形虫的检测和防治主要针对I型RH株和II型ME49株。 

弓形虫病的早期诊断仍是亟待解决的重要问题，该病诊断方法大致可分为病原学检查、免疫学方法、分子生物学技术等3类。传统的病原学检查方法如镜检、虫体分离法等费时、费力，且特异性和敏感性不高，不能适应当前弓形虫病诊断及防治的需要。免疫学诊断方法，即检测弓形虫抗体，但弓形虫病患者常伴有免疫功能低下，往往会出现抗体水平的下降，难以做出正确的诊断。分子生物学诊断方法简便快捷，灵敏性好，特异性高，包括普通PCR、巢式PCR、荧光定量PCR、原位PCR等，所应用的诊断基因标靶包括B1、ITS-1、P30基因等，但由于这些诊断基因在弓形虫基因组中的拷贝数并不高(1-30拷贝)，影响该病的诊断。因此，选择高特异性及敏感性的临床生物标志物，并建立快速、准确的实验方法，对于弓形虫的检测、诊断和疾病的治疗具有重要的临床价值。 

近年来，发现microRNAs(miRNAs)与各种疾病的发生和发展有着极为密切的关系。miRNAs表达具有较高的组织特异性、在血液中具有较高稳定性，推测miRNAs可能是一个理想的生物检测标志物，并已经应用于急性心肌损伤，糖尿病，肝癌，肺癌等临床研究。疾病的早期诊断，也成为miRNAs研究的热点。因其具有取材方便、创伤小、可连续体外检测及择时检测的优点，并且血浆中miRNAs的高度稳定性对于疾病的临床诊断具有可靠 性强，准确率高的特点。因此，筛选弓形虫感染的特异性miRNA作为检测标志物，建立基于该标志物的检测方法意义重大。 

发明内容

本发明的目的是提供可检测感染弓形虫的标识性mmu-miR-217-5p。 

可检测感染弓形虫的标识性mmu-miR-217-5p，它的碱基序列为uacugcaucaggaacugacugga。 

检测感染弓形虫的Q-PCR试剂盒，包括针对碱基序列为uacugcaucaggaacugacugga的mmu-miR-217-5p，所设计的引物； 

所述的引物包括碱基序列tactgcatcaggaactgactgga； 

所述的弓形虫为弓形虫RH株或ME49株。 

本发明提供了可检测感染弓形虫的标识性mmu-miR-217-5p，在弓形虫感染的小鼠模型中，通过提取血浆总RNA，反转录获得其cDNA，采用Q-PCR技术筛选了高表达的mmu-miR-217-5p，与弓形虫感染具有明显的相关性，可作为弓形虫病诊断的标识性miRNA。并以其作为标志物建立了弓形虫感染的Q-PCR检测方法，具有较高的敏感性和特异性，为弓形虫病的临床诊断提供一种可靠的检测依据和快速检测方法，具有重要的临床应用价值。附图说明 

图1.感染RH株和ME49株小鼠血浆中mmu-miR-217-5p的差异表达情况； 

图2.感染RH株和ME49株小鼠血浆中mmu-miR-217-5p的定量分析； 

图3.ROC曲线分析血浆mmu-miR-217-5p对不同虫株引起弓形虫病的鉴别效能； 

图4.血浆mmu-miR-217-5p及cel-miR-39的PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析。 

具体实施方式

实施例1BALB／c攻虫实验