[发明专利]一种植物内生真菌布雷正青霉菌F4a及其应用

权利要求书

1.一种利用植物内生真菌布雷正青霉菌F4a制备布雷菲德菌素A的方法，其特征在于：

1)将布雷正青霉菌F4a发酵种子液按照体积比1:10-1:20接种于PSB发酵培养基，28℃培养7-15d；

2)将上述所得发酵液采用4-6层纱布过滤，固液分离得到上清液及菌丝体；过滤上清液采用HP20大孔吸附树脂固相萃取，用70-100％乙醇洗脱获得粗提物；菌丝体经丙酮提取得提取物；合并两部分提取物减压浓缩后进一步经MeOH精制得到BFA含量超过50-65％的粗提取物；

3)将上述粗提取物用减压快速硅胶柱色谱法分离，使用49:1-0:10(v/v)二氯甲烷/甲醇溶剂系统进行梯度洗脱，收集体积百分比为47:3-44:6的二氯甲烷/甲醇洗脱液，即得纯度为90-99％的布雷菲德菌素A；

或，将所述粗提取物通过丙酮溶解，常温下过夜，即得纯度为90-99％的布雷菲德菌素A；

植物内生真菌为布雷正青霉菌F4a(Eupenicillium brefeldianum F4a)，于2012年12月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC M 2012531；

所述PSB培养基为：20.0g蔗糖，200g土豆浸出液，用蒸馏水配平至1L，pH 5.0～8.0，115℃灭菌30min。

2.按权利要求1所述的利用植物内生真菌布雷正青霉菌F4a制备布雷菲德菌素A的方法，其特征在于：

所述步骤1)将菌株F4a用划线法接种于PSA培养基上，于28℃恒温培养4-6d；然后采用挖块法接种于装有50mL PSB培养基的250mL三角瓶中，于28℃180rpm恒温摇床培养72h作为发酵种子液。

3.按权利要求1所述的利用植物内生真菌布雷正青霉菌F4a制备布雷菲德菌素A的方法，其特征在于：所述的化合物可用于制备成医用、兽用或农用非治疗目的的抗真菌剂。

4.按权利要求1所述的利用植物内生真菌布雷正青霉菌F4a制备布雷菲德菌素A的方法，其特征在于：所述的化合物可用于制备成杀虫剂。

5.按权利要求4所述的利用植物内生真菌布雷正青霉菌F4a制备布雷菲德菌素A的方法，其特征在于：所述的化合物可作为白色念珠菌、立枯丝核菌、镰刀菌的抑菌剂。

6.按权利要求4所述的利用植物内生真菌布雷正青霉菌F4a制备布雷菲德菌素A的方法，其特征在于：所述的化合物可制备为杀卤虫剂。