[发明专利]含有抑制黑色素生成的siRNA细胞培养物美白精华液

权利要求书

1.一种含有抑制黑色素生成的siRNA细胞培养物美白精华液，其特征在于：由以下组分组

成：表皮细胞培养液浓缩液79.3%、抑制黑色素的siRNA-脂质体复合物0.5%、甘油20%和玻尿酸0.2%；其中，所述的抑制黑色素的siRNA-脂质体复合物是由低熔点阳离子脂质体SUV与siRNA产物在无菌生理盐水中按摩尔比1:1混合均匀得到的，其中，所述的siRNA为根据目的DNA序列设计的siRNA，长度为21nt，序列为：

正义链：5’GUACAACAGCCAUCAGUCUUU

反义链：5’CUCAUGUUGUCGGUAGUCAGA。

2.根据权利要求1所述的一种含有抑制黑色素生成的siRNA细胞培养物美白精华液，其特

征在于：所述的表皮细胞培养浓缩液是表皮细胞培养液按照5:1的体积比例浓缩制成。

3.根据权利要求1所述的一种含有抑制黑色素生成的siRNA细胞培养物美白精华液，其特

征在于： 所述的siRNA的目的DNA序列是由美国国家卫生研究院的NCBI标准数据库中选酪氨酸酶基因tyr片段序列。

4.权利要求1所述的一种含有抑制黑色素生成的siRNA细胞培养物美白精华液的制备方法，

其特征在于：由下述步骤组成：

步骤1）选定目的DNA序列：以酪氨酸酶作为靶点，根据美国国家卫生研究所的NCBI标准数据库中选酪氨酸酶基因tyr片段序列为靶序列；

步骤2）设计并合成siRNA：根据tyr基因设计siRNA片段，并用化学合成法合成；

步骤3）制备siRNA-脂质体复合物：用低熔点阳离子脂质体SUV与步骤2）得到的siRNA产物，在生理盐水中按摩尔比1:1均匀混合，制成siRNA-脂质体复合物；

步骤4）收集人表皮细胞培养液：采集获取新生儿脐带表皮细胞，原代培养3-5天，传代培养3-6代，收集培养液；

步骤5）原液过滤：收集的细胞培养液经过过滤系统，滤去细胞碎片及微生物；

步骤6）过滤液浓缩：过滤液置于超滤管中低温高速离心，得到的浓缩液置于4℃冰箱储存；

步骤7）加入甘油及玻尿酸：向步骤6）所述的浓缩液中加入步骤3）所述的siRNA-脂质体复合物以及医用甘油和玻尿酸原液，混合均匀，即制备完成精华液。

5.根据权利要求4所述的一种含有抑制黑色素生成siRNA的细胞培养物美白精华液的制备

方法，其特征在于：所述的步骤1）中，目的DNA序列为：

ATGCTCCTGG CTGTTTTGTA CTGCCTGCTG TGGAGTTTCC AGACCTCCGC

TGGCCATTTC CCTAGAGCCT GTGTCTCCTC TAAGAACCTG ATGGAGAAGG

AATGCTGTCC ACCGTGGAGC GGGGACAGGA GTCCCTGTGG CCAGCTTTCA

GGCAGAGGTT CCTGTCAGAA TATCCTTCTG TCCAATGCAC CACTTGGGCC

TCAATTTCCC TTCACAGGGG TGGATGACCG GGAGTCGTGG CCTTCCGTCT

TTTATAATAG GACCTGCCAG TGCTCTGGCA ACTTCATGGG ATTCAACTGT。

6.根据权利要求4所述的一种含有抑制黑色素生成的siRNA细胞培养物美白精华液的制备方法，其特征在于：所述的步骤3）中siRNA-脂质体复合物浓度为20ug/ml。

7.根据权利要求4所述的一种含有抑制黑色素生成的siRNA细胞培养物美白精华液的制备方法，其特征在于：所述的步骤4）中原代培养基为NaHCO₃的含量为0.37%的高糖DMEM培养基，胎牛血清含量20%；传代培养基为NaHCO₃的含量为0.37%的高糖DMEM培养基，胎牛血清含量5%，消化细胞所用的消化液是不含EDTA的0.025%的胰酶，消化细胞的条件为37℃，CO₂浓度5%，3分钟；收集的细胞培养液为细胞第3-6代的细胞培养液。