[发明专利]一种圆红冬孢酵母菌Y0及其应用

说明书

技术领域：

本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一种圆红冬孢酵母菌Y0及其应用。 

背景技术：

酵母营养丰富、大小适中，是很多生物优良的天然饵料，同时酵母也是一类腐生菌，可以分解多种物质，利用养殖水体中的有机物、氨氮、硫化氢等养殖废物，并形成优势种群，有效地抑制其它有害微生物的生长，起到生物防治的作用。近年来随着水产养殖技术的进步，酵母在水产养殖中的应用越来越广泛。 

然而目前市场上可应用海水养殖的酵母还非常少，常用的酵母仍然是来自于食品酿造的面包酵母（Saccharomyces cerevisiae），这种来自于陆生环境的酵母并不能适应海水环境，因此不能发挥净化水质的作用，其对于海洋水产动物生长的影响也缺乏科学的报道。基于此种情况，迫切需要分离适应于海洋环境的单细胞酵母用于海洋水产养殖。另一方面，生产酵母的原料多为人类或动物的食品材料，由此导致生产成本较高，最终形成的酵母产品价格也较高，限制了其在水产养殖中的广泛应用。因此需要探索新的廉价的酵母生产原料。 

此外，我国海水养殖蓬勃发展以及强劲扩张并没有同步进行养殖废水排放的严格限制，由此带来了严重的环境污染问题。在社会日益重视环境保护的今天，发展环境友好型水产养殖模式，走可持续的水产养殖发展道路成为必然趋势。目前，一些养殖废水处理方法虽然将养殖废物从水体中分离出去，但是不能有效的利用养殖废物。如何进行养殖废水、废物的资源化利用是发展环境友好型水产养殖模式必须要解决的问题。 

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种提供一株具有高营养价值、高效利用海水养殖废水的海洋圆红冬孢酵母菌(Rhodosporidium toruloides)Y0，该菌于2013年12月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号：CCTCCNo：M2013725。 

本发明所述的圆红冬孢酵母菌（Rhodosporidium toruloides）Y0分离于广东湛江对虾养殖场排污口。酵母菌分离培养基为YPD酵母专用培养基。圆红冬孢酵母菌筛选培养基为对虾养殖废物培养基。本筛选的目的是获得能在对虾养殖废物培养基生长的酵母种类，分离的酵母将具有在低糖或无糖条件下利用养殖废物的能力。 

圆红冬孢酵母菌（Rhodosporidium toruloides）Y0的菌落形态特征和细胞形态特征：菌落在YPD培养基平板上培养24小时为白色，72小时后为浅红色，菌落圆形突起，表面光滑，质地粘稠，奶油状，边缘较为整齐，无酒香味。细胞形态球形或椭球形，单个，见出芽（如图1所示）。圆红冬孢酵母菌的对虾养殖废物培养基上生长状态与YPD培养基类似。 

以酵母基因组提取试剂盒(购自Takara，China)提取Y0菌株的DNA。PCR扩增并测序18S rDNA、26S rDNA、ITS rDNA片段，其18S rDNA、26S rDNA、ITS rDNA序列分别如SEQ ID NO.1～3所示，经blast比对及种系发生分析表明：Y0菌株的18S rDNA序列与Rhodosporidium toruloides序列关系最近，以100％的支持率聚为一枝。与Y0菌株的26S rDNA、ITS rDNA最高相似度达99％的酵母只有Rhodosporidium toruloides，均以100％的支持率聚为一枝。根据以上多基因同源序列结果及系统发育分析结果得出，Y0菌株属圆红冬孢酵母菌(Rhodosporidium toruloides)的新菌株，命名为圆红冬孢酵母菌(Rhodosporidium toruloides)Y0，该菌种已于2013年12月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国 武汉市武汉大学，保藏编号：CCTCC No：M2013725。 

经实验测定圆红冬孢酵母菌（Rhodosporidium toruloides）Y0具有丰富的营养，因此，本发明的第二个目的是提供圆红冬孢酵母菌（Rhodosporidium toruloides）Y0在生产水产养殖动物的功能性饵料添加剂中的应用。 

经蔗糖浓度梯度测试，确定在养殖废水中培养圆红冬孢酵母菌（Rhodosporidium toruloides）Y0于48h达到稳定期。添加适量蔗糖可以显著增加细胞浓度，蔗糖的最优添加量为14g·L^-1，细胞浓度6.1×10⁸个·ml^-1。