[发明专利]一种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法。 

背景技术

喹诺酮类抗菌药氟甲喹(Flumequine)具有疗效显著、抗菌谱广、不会轻易出现交叉耐药性的特点，被广泛应用于人和动物多种感染疾病的防治中。众所周知，食用水产动物较难保存，对水质要求较高，极易感染细菌从而导致使用者出现肠道疾病等，而作为一种高效的广谱抗菌药，氟甲喹不仅对于革兰阳性细菌和革兰阴性细菌具有一定的抑制作用，对于水产动物感染的大肠杆菌病，弧球菌属和单孢菌属病等也有较强的抑制作用；并且，由于使用氟甲喹的安全范围广、无不良反应、药物残留小等，也使氟甲喹在抗菌药中的应用更为广泛。 

氟甲喹存在两种对映体，其结构式如下： 

由于不同的对映体在手性条件下反应可显示不同的反应性，而手性药物的对映体分子于手性固定相上的手性识别是许多因素综合作用的结果，不同的体系存在着不尽相同的手性识别机理，为了更进一步的对氟甲喹进行深入研究，研究手性化合物对映体及手性固定相的拆分机理十分重要，对于手性药物的研究和开发都具有重要意义，鉴于此，本发明提供一种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法，该方法能够成功实现氟甲喹手性对映体及手性固定相的拆分，为氟甲喹的深入研究提供了条件。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法，其特征在于包括以下步骤： 

（1）用体积比为80%～100%:20%～0%的无水乙醇与异丙醇的混合物作为流动相将氟甲喹溶解并稀释配置成20μg/ml～30μg/ml的溶液，并用微孔滤膜过滤； 

（2）取匀浆后的水产品2g于离心管中，加入步骤（1）中配置的氟甲喹溶液10～100mL，振荡后加入2g～3g无水Na₂SO₄及15ml～25ml乙酸乙酯，用漩涡混匀后再将离心管置于离心机上进行离心处理，然后转移离心管中的乙酸乙酯层到分液漏斗中；离心管中的残渣再用5ml～10ml乙酸乙酯溶解并进行离心处理，将该离心后的乙酸乙酯层与上述分液漏斗中的乙酸乙酯层进行混合； 

（3）向上述分液漏斗中加入20ml～30ml正己烷溶液，充分振荡使其混匀，静置分层后弃正己烷层，将乙酸乙酯溶液转移于水浴锅中蒸干，蒸干后的残渣用无水乙醇溶解定溶至1ml～2ml，并采用微孔滤膜进行过滤后得到溶液A，溶液A中加入三乙胺作为添加剂，使其体积分数为0.1%～0.3%； 

（4）采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL OD-H手性柱，该手性柱的填料为5μ硅胶表面涂布纤维素-三-[3，5-二甲苯基氨基甲酸酯]；所述手性柱的柱温为20℃～30℃；检测时的流速为0.5mL/min～0.7mL/min，波长为254nm。 

作为优选，所述无水乙醇占乙醇和异丙醇混合物的体积分数为100%。 

优选地，在所述溶液A中加入体积分数为0.3%的三乙胺作为添加剂。 

所述步骤（4）中采用高效液相色谱仪对所述溶液A进行检测时的流速优选为0.6mL/min；检测波长为254nm。 

所述步骤（4）中采用高效液相色谱仪对所述溶液A进行检测时所述手性柱的柱温优选为20℃。 

所述微孔滤膜过滤所采用的微孔直径为0.45μm。 

与现有技术相比，本发明用于检测水产品中氟甲喹手性对映体，成功实现了氟甲喹手性对映体及手性固定相的拆分，其中，对映体S-（-）-FMQ及R-（+）-FMQ在10μg/mL～100μg/mL浓度范围内与其响应值呈良好的线性关系，回归方程及相关系数分别为Y=96.62X-238.50、R²=1.0000及Y=112.32X-281.04、R²=1.0000，样品平均回收率分别为85.33%和83.28%，日间精密度分别为5.4%和4.7%，检出限分别为0.05μg/g和0.04μg/g，定量限分别为0.08μg/g和0.07μg/g。 

附图说明

图1为本发明实施例中对映体分离度与乙醇含量之间的关系曲线图； 

图2为本发明实施例中对映体分离度与三乙胺浓度之间的关系曲线图； 

图3为本发明实施例中对映体分离度与流速之间的关系曲线图；