[发明专利]一种10-去乙酰基巴卡亭III的制备方法

权利要求书

1.一种10-去乙酰基巴卡亭III的制备方法，其特征在于，包括：

（1）以7-木糖基紫杉烷为反应原料，使用硼氢化物选择性去除7-木糖基紫杉烷的C13位侧链；

（2）将步骤（1）所得产物使用木糖苷酶酶解以去除其C7位的木糖基，从而得10-去乙酰基巴卡亭III。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述7-木糖基紫杉烷为7-木糖-10-去乙酰紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰紫杉醇C或7-木糖-10-去乙酰三尖杉宁碱的任意一种或几种的混合物；

优选地，按重量百分比计，所述7-木糖基紫杉烷中，7-木糖-10-去乙酰紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰紫杉醇C或7-木糖-10-去乙酰三尖杉宁碱的总含量为20%-100%、优选为50%-100%、更优选为70%-90%。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述硼氢化物为具有RBH₄结构的任何一种化合物或几种化合物的混合物，其中R为金属元素或有机取代基；

优选地，所述金属元素为Na、K、Li；

优选地，所述有机取代基为Bu₄N-、Et₄N-或Me₄N-。

4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述硼氢化物与所述7-木糖基紫杉烷摩尔比为（2-20）：1、优选为（5-10）：1、更优选为8:1；

优选地，步骤（1）的反应溶剂为四氢呋喃或甲醇；

优选地，步骤（1）的反应温度为0-60℃、优选为20-40℃、更优选为30℃。

5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，将步骤（1）所得产物用极性溶剂溶解后再加入木糖苷酶进行酶解；

优选地，所述极性溶剂为甲醇、N’,N’-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜或其任意比例的混合物。

6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述木糖苷酶为源于Leifsonia shinshuensis DICP 16菌的发酵液、菌体悬浮液或菌体破碎液；

优选地，每摩尔步骤（1）所得产物加入0.2-2U、优选0.5-1U、更优选0.8U的木糖苷酶；

优选地，所述酶解反应温度为30-35℃、优选32℃；

优选地，所述酶解反应的pH值为6-7、优选6.5；

优选地，步骤（2）还包括将酶解反应液过大孔吸附树脂柱，然后用70%-90%乙醇解吸的步骤；进一步优选地，所述大孔吸附树脂柱为AB-8、D101、HP20或XAD1600大孔吸附树脂柱。

7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括对步骤（2）所得产物进行分离纯化和再结晶的步骤。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述分离纯化使用硅胶层析柱进行；

优选地，所述硅胶层析柱的硅胶粒度为200-800目、优选为300-800目、更优选为300-400目；

优选地，所述硅胶层析柱的径高比为1：（1-10）、优选为1：（2-5）、更优选为1:3；

优选地，所述硅胶层析柱的装柱方式为干法或湿法装柱；

优选地，步骤（2）所得产物与硅胶的质量比为1:（15-100）、优选为1：（30-60）、更优选为1:50；

优选地，使用二氯甲烷和甲醇的混合溶液作为流动相；进一步优选地，二氯甲烷与甲醇的体积比为100:3-100:10；进一步优选地，所述流动相的用量为5-15个柱体积、优选为10个柱体积。

9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述再结晶的溶剂为甲醇或乙腈。

10.根据权利要求1-9任一项所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将7-木糖基紫杉烷溶解于四氢呋喃中，加入2-20倍、优选5-10倍、更优选8倍摩尔量的硼氢化物、优选硼氢化钠，于0-60℃、优选20-40℃、更优选30℃下进行反应，反应结束后，用酸性水溶液、优选乙酸水溶液进行稀释，然后用二氯甲烷萃取，并减压浓缩二氯甲烷相；

（2）将步骤（1）所得产物溶解于极性溶剂、优选甲醇、N’,N’-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜中，然后加入到木糖苷酶溶液中，每摩尔步骤（1）所得产物加入0.2-2U、优选0.5-1U、更优选0.8U的木糖苷酶；然后在pH6-7、30-35℃条件下搅拌反应，反应结束后过大孔吸附树脂柱、优选过AB-8、D101、HP20或XAD1600大孔吸附树脂柱，再用70%-90%乙醇解吸，蒸干解吸液；

（3）将步骤（2）所得产物采用硅胶柱层析进行分离，流动相为体积比为100:3-100:10的二氯甲烷与甲醇的混合溶液；所述流动相的用量为5-15个柱体积；收集目标馏分，并进行减压干燥；

（4）将步骤（3）所得产物加热溶解于甲醇中，冷却后获得结晶，过滤并洗涤晶体，干燥后即得10-去乙酰基巴卡亭III。