[发明专利]一种前列腺小体外泄蛋白抗原及其抗体与应用

权利要求书

1.一种前列腺小体外泄蛋白抗原，其特征在于，采用如下方法制备而成：

取500毫升慢性前列腺炎症病人晨尿中段尿，加入等量pH7.3的HEPES缓冲液和蛋白酶抑制剂, 用纱布过滤；取过滤液分别置于10只50毫升离心管，在4°C低温下400g离心10分钟，去沉淀，取上清液在4°C低温下10,000g离心20分钟，去沉淀，取上清液分别置于200只3毫升超速离心管，在4°C低温下100，000g离心120分钟；倒去上清液，取沉淀加入2.5毫升pH7.8的TBS缓冲液和蛋白酶抑制剂, 混匀；在4°C低温下100，000g离心120分钟，倒去上清液，取沉淀分别溶于2.5毫升0.5 % NP-40，80mM NaCl, 0.2% Deoxycholate, 50 mM Tris, pH 8.0和蛋白酶抑制剂；在4°C低温下100，000g离心20分钟；取上清液，上样TSKgel G3000PW， 280纳米读数，取在40kDa区域峰值蛋白，-80°C冷冻保存，即得。

2.一种前列腺小体外泄蛋白抗原的制备方法，其特征在于，

取500毫升慢性前列腺炎症病人晨尿中段尿，加入等量pH7.3的HEPES缓冲液和蛋白酶抑制剂, 用纱布过滤；取过滤液分别置于10只50毫升离心管，在4°C低温下400g离心10分钟，去沉淀，取上清液在4°C低温下10,000g离心20分钟，去沉淀，取上清液分别置于200只3毫升超速离心管，在4°C低温下100，000g离心120分钟；倒去上清液，取沉淀加入2.5毫升pH7.8的TBS缓冲液和蛋白酶抑制剂, 混匀；在4°C低温下100，000g离心120分钟，倒去上清液，取沉淀分别溶于2.5毫升0.5 % NP-40，80mM NaCl, 0.2% Deoxycholate, 50 mM Tris, pH 8.0和蛋白酶抑制剂；在4°C低温下100，000g离心20分钟；取上清液，上样TSKgel G3000PW， 280纳米读数，取在40kDa区域峰值蛋白，-80°C冷冻保存，即得。

3.一种与权利要求1所述抗原特异对应的抗体。

4.权利要求1所述抗原和权利要求3所述抗体在制备检测或诊断慢性前列腺炎的试剂盒中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的试剂盒采用ELISA法或胶体金法制备而成。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的试剂盒包含针对前列腺小体外泄蛋白抗原的单克隆检测抗体、包被缓冲液、洗涤缓冲液、封闭缓冲液、酶标抗体。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：其特征在于，前列腺小体外泄蛋白抗原检测抗体为单克隆鼠抗人前列腺小体外泄蛋白抗原的抗体。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：其特征在于，还包含标准品和阴性对照；所述标准品为对前列腺小体外泄蛋白检测抗体产生免疫反应的人前列腺小体外泄蛋白抗原。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述包被缓冲液为碳酸盐或dPBS；所述洗涤缓冲液为含洗涤剂的dPBS。

10.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述检测抗体识别前列腺小体外泄蛋白抗原。