[发明专利]利用LRP4针对神经传递障碍疾病的诊断组合物

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及诊断组合物。

背景技术

神经传递障碍疾病重症肌无力是一种自身免疫疾病，将导致神经肌肉接头的功能紊乱。70%患有重症肌无力的病人都携带乙酰胆碱受体的自身抗体，另外10%病人携带MuSK的自身抗体。但是，20%的病人在血清中检测不到乙酰胆碱受体或MuSK的自身抗体。因此，需要一种针对神经肌肉相关的疾病如重症肌无力的诊断组合物。

发明内容

本发明提供了一种针对神经传递障碍疾病的诊断组合物。

具体技术方案：

利用LRP4针对神经传递障碍疾病的诊断组合物，包括人低密度脂蛋白受体相关蛋白4 LRP4或LRP4模拟表位。

为了达到更好的效果，所述的诊断组合物，还进一步包括聚集蛋白、聚集蛋白模拟表位、乙酰胆碱受体、乙酰胆碱受体模拟表位、肌肉特异性酪氨酸激酶的任一种或几种。

所述神经传递障碍疾病包括重症肌无力，肌肉萎缩症，或者先天性肌无力综合征（CMS）。

本发明还涉及利用LRP4针对神经传递障碍疾病的诊断试剂盒，前述诊断组合物。

为了更好的达到检测的效果，诊断组合物中LRP4或LRP4模拟表位上有可检测的标签。这样检测结果会更加直观，便于观察。

所述标签可以为¹²⁵I。

所述的诊断试剂盒，还可以通过有色颗粒免疫测定法检测抗原-抗体复合物。同样具有直观的结果呈现效果。

本发明还一种检测LRP4抗体的方法，所述方法包括检测由前述的诊断组合物与样品接触后所形成的抗原-抗体复合物。

这种检测LRP4抗体的方法，选自：BIACORE分析、FACS、免疫荧光、免疫细胞化学、免疫印记、放射性免疫分析、ELISA、免疫沉淀反应、沉淀素反应、胶扩散沉淀反应。

本发明的有益效果是：提供了一种效果良好的利用LRP4针对神经传递障碍疾病的诊断组合物，填补了目前研究及市场的空缺，具有广阔的市场前景。

附图说明

图1：采用ELISA 方法检测针对LRP4的自身抗体。

图2：重症肌无力的病人血清中检测不到抗乙酰胆碱受体/MuSK的抗体，但是能检测到LRP4的自身抗体。

图3：免疫LRP4胞外端重组蛋白诱发小鼠产生LRP4自身抗体，并引起小鼠重症肌无力症状，肌电图动物电位不能持续维持。

图4：注射LRP4胞外端重组蛋白的小鼠神经肌肉接头形态出现异常，包括乙酰胆碱受体染色呈碎片，突触前运动神经元退化，突触小泡密度下降。 

图5：注射LRP4胞外端重组蛋白的小鼠血清能够抑制MuSK蛋白的酪氨酸磷酸化，减少LRP4细胞表面定位以及聚集蛋白诱导的乙酰胆碱受体聚集，并部分激活补体反应。

图6: 注射抗LRP4兔免疫球蛋白IgG的小鼠具有重症肌无力症状。

图7：采用ELISA 方法检测针对聚集蛋白的自身抗体。

图8：聚集蛋白自身抗体阳性的重症肌无力病人血清能够识别外源表达的聚集蛋白。

图9：聚集蛋白自身抗体阳性的重症肌无力病人血清能够抑制聚集蛋白引起的乙酰胆碱受体在肌肉细胞中的聚集。

具体实施方式

实施例1 LRP4自身抗体存在于重症肌无力病人血液，能够诱发重症肌无力

自发性免疫疾病重症肌无力是一种常见的神经突触疾病，10万人中约有10-20个患病者。其中约有80%的病人其体内的抗体能够结合肌肉的乙酰胆碱受体，这些抗体使乙酰胆碱受体数目减少或是失去功能，从而导致神经肌肉传递中的肌无力。尽管大部分的重症肌无力都是由于自身抗体结合乙酰胆碱受体引发的，但是约有20%的病人体内检测不到乙酰胆碱受体的抗体。2001年，在乙酰胆碱受体抗体阴性的病人中，有约4-50%的病人可以检测出MuSK抗体。用MuSK胞外区免疫兔后可导致重症肌无力，乙酰胆碱受体的数目减少。尽管一系列的实验证明了乙酰胆碱受体和MuSK的抗体导致了重症肌无力，但是还有10%的病人血清中鉴定不到这些抗体。