[发明专利]一种肿瘤疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种肿瘤疫苗，包括肿瘤细胞分泌的小体exosomes，其特征在于所述的肿瘤细胞是经DNA甲基转移酶抑制剂和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂加药处理的。

2.根据权利要求1所述的肿瘤疫苗，其特征在于，所述DNA甲基转移酶抑制剂可选自下列药物中的一种或几种：阿扎胞苷(5-azacytidine)、5-氮杂-2’-脱氧胞苷--又名地西他滨decitabine、Zebularine、5-F-CdR、Hydralazine、SGI-1027、RGl08、EGCC、肼苯哒嗪胺(procainamide)、肼苯哒嗪(procaine)、MG-98、Psammaplin A、姜黄素(curcumin)；所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂可选自下列药物中的一种或几种：丁酸、戊酸和苯丁酸及其盐类化合物、曲古抑菌素(trichostatin A，TSA)、SAHA(suberoylanilide hydroxamic)、NVP-LAQ824、Pyroxamide、CBHA、Oxamflatin、Scriptaid、MM232、Trapoxin、Apicidin、FK228、WF3161、CHAP31、HC-toxin、LBH589、PDX-101、Tubacin、ACY-1215、MGCD0103、SAHA、Pomidepsin、Plitidepsin。

3.根据权利要求1-2任意一项所述的肿瘤疫苗，其特征在于，所述DNA甲基转移酶抑制剂为肼苯哒嗪；所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为SAHA。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗还包括佐剂。

5.一种药物组合物，包含DNA甲基转移酶抑制剂和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂，其特征在于可用于制备权利要求1-4任意一项所述的肿瘤疫苗。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述DNA甲基转移酶抑制剂为肼苯哒嗪；所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为SAHA。

7.根据权利要求5或6任意一项所述的药物组合物，其特征在于DNA甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂比例为1：1。

8.一种权利要求1-4任意一项所述的肿瘤疫苗的制备方法，包括：使用DNA甲基转移酶抑制剂和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理肿瘤细胞；分离与纯化肿瘤细胞分泌的exosomes。

9.根据权利要求8所述的制备肿瘤疫苗的方法，包括：肿瘤细胞用含100ml/L胎牛血清的DMEI培养液，在37℃50ml/L C0₂孵箱中培养，细胞呈单层贴壁生长，每3-4天传代1次，待细胞生长至对数期时接种；接种24h后用DNA甲基转移酶抑制剂和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理细胞，分别在加药后24h收集培养上清液，并4℃保存；将收集到的肿瘤细胞培养上清液离心去除细胞，取上清液；再离心去除细胞碎片，收集上清液，通过100kU MWCOCentriplus离心超滤管浓缩超滤，离心得到浓缩液，将分离纯化的浓缩液移至1.5m1的离心管中，4℃下用水平转角以100kg超速离心，所得沉淀即含有exosomes。

10.一种权利要求1-4任意一项所述肿瘤疫苗在制备抗肿瘤药物中应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为抗血癌、骨癌、淋巴癌、肠癌、肝癌、胃癌、盆腔癌、肺癌、脑癌、神经癌、乳腺癌、食道癌、肾癌的一种或几种的药物。