[发明专利]一种高中和活性抗日本脑炎病毒单克隆抗体的重链和轻链可变区

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种高中和活性抗日本脑炎病毒单克隆抗体的重链和轻链可变区。

背景技术

日本脑炎（我国又称流行性乙型脑炎）是由日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的急性中枢神经系统感染，是一种人畜共患传染病，流行于我国广大地区，临床以高热、惊厥、意识障碍及脑膜刺激症为主，病死率达10～20%，幸存者后遗症可达15～50%，是卫生部公布的死亡人数最多的六种传染病之一，仍然严重威胁人民生命健康。此外，近年来日本脑炎的流行地域有不断扩大的趋势，已成为热带、亚热带地区一个非常严重的公共卫生问题，更可作为潜在的生物战剂使用，其重要性不容忽视。

目前，JEV致病机理认为：病毒经带毒蚊子叮咬进入人体，先在皮肤毛细血管内皮细胞核局部淋巴结等处增殖，经毛细血管和淋巴管进入血流，引起第一次毒血症。随后，病毒随血流播散到肝、脾等处的单核巨噬细胞中继续大量增殖后，再次入血，引起第二次病毒血症，临床上表现为发热、头痛、寒战、全身不适等流感样症状。绝大多数感染者病情不再继续发展，成为隐性感染。少数免疫力不强的病人，病毒可突破血脑屏障侵犯中枢神经系统，在神经细胞内增殖，引起脑实质和脑膜炎症，出现严重的中枢神经系统症状，表现为高热、头痛、呕吐、惊厥、抽搐、脑膜刺激征等，进一步可发展为昏迷、中枢性呼吸衰竭或脑疝而导致死亡。乙脑感染后免疫力稳定而持久，其中体液免疫起到主要作用，感染后机体和产生具有中和作用的特异性IgM、IgG抗体和/或血凝抑制抗体。因此能够尽早从患者体内清除病毒，对于组织JEV入侵神经细胞、在神经细胞内增殖以及随后的病理损伤、病情发展有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高中和活性抗日本脑炎病毒单克隆抗体的重链和轻链可变区，获得高中和活性小鼠抗JEV单克隆抗体的可变区基因的核苷酸序列以及该基因编码的氨基酸序列。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种高中和活性抗日本脑炎病毒单克隆抗体，包括重链和轻链，所述轻链的可变区的3个互补决定区（CDR）序列为：

CDR1:Gln-Ser-Val-Ser-Thr-Ser-Gly-Tyr-Ser-Tyr；

CDR2：Leu-Val-Ser；

CDR3:Gln-His-Ile-Arg-Glu-Leu-Thr-Arg；

所述重链的可变区的3个互补决定区（CDR）序列为：

CDR1:Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asp-Tyr-Ala；

CDR2:Ile-Asn-Thr-Ala-Thr-Gly-Glu-Pro；

CDR3:Ala-Ser-Asp-Gly-Arg-Tyr-Trp-Tyr-Phe-Gly-Val。

所述的单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

编码单克隆抗体轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.3所示，编码单克隆抗体重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

高中和活性抗日本脑炎病毒单克隆抗体在制备以流行性乙型脑炎病毒为靶点的基因工程抗体或疫苗的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

1、本发明采用鼠脑悬液JEV（SA14）免疫BALB/c×昆明鼠子一代，制备了一组小鼠抗JEV mAbs。用ELISA筛选出分泌JEV杂交瘤细胞。在微量阻止培养中和实验中，测得抗体效价为320000，在小鼠的被动保护实验中测得抗体的效价为3，200，000。编码2F2mAb可变区基因序列在构建对流行性乙型脑炎有治疗作用的嵌合抗体和人源化抗体等方面有巨大潜力。

2、本发明克隆了高中和活性抗日本脑炎病毒单克隆抗体的轻链、重链可变区基因和氨基酸序列，序列分析证实了该抗体序列的惟一性。

3、本发明通过ELISA试验，说明纯化的抗日本脑炎病毒单克隆抗体重链可变区能与乙型脑炎病毒特异性结合，进一步证实该序列的有效性。

4、分别分析并获得了轻链和重链可变区的CDR，将本发明的2F2mAb重链可变区基因的CDR区移植到人源可变区的FR中，形成CDR移植抗体也称重构抗体或人源化抗体。利用CDR移植技术改造抗体，可获得保持鼠源性亲本mAb的特异性，而又更加接近人抗体的新型抗体，用于制备对流行性乙型脑炎有治疗作用的人源化抗体，为构建高亲和力的抗流行性乙型脑炎病毒基因工程抗体打下基础。