[发明专利]一种基于糖修饰的鱼皮抗冻蛋白多肽及其制备方法

权利要求书

1.一种基于糖修饰的鱼皮抗冻蛋白多肽，其特征在于按照如下方法制备：

（1）、将冷冻鱼皮在10～12℃下进行解冻，然后用水将鱼皮清洗干净，再将鱼皮打成浆，得鱼皮浆；接着向鱼皮浆中加入2.0～5.0倍鱼皮浆重量的水，然后利用胶体磨将鱼皮浆磨成鱼皮浆液，再在3000～5000g条件下离心5～8分钟，去上层脂肪，得去脂鱼皮浆液；

（2）、将去脂鱼皮浆液用超声波处理5～10分钟；然后按照0.4～0.7%鱼皮重量的重量百分比比例向经过超声波处理的鱼皮浆液体中加入风味蛋白酶，在40～50℃、pH6.5～7.5条件下进行酶解反应1.5～2.5小时；再在85～90℃下保温3～5分钟，冷却至室温；在3000～5000g条件下离心3～6分钟，收集上清液；

（3）、将步骤（2）所得的上清液通过二步超滤方法进行处理，先用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，取滤过液，得分子量小于5000的多肽，再将滤过液用孔径为3000道尔顿的陶瓷膜超滤，截留分子量为3000～5000道尔顿的多肽，冷冻干燥，得鱼皮蛋白多肽粉；

（4）、按照鱼皮蛋白多肽粉和乳糖之间质量比为3.5～5:1的比例将鱼皮蛋白多肽粉和乳糖混合，然后溶解于去离子水中，轻轻搅拌5～10分钟，溶液最终浓度为12～15%（w/w）；冷冻干燥，得鱼皮蛋白多肽-乳糖冻干粉；

（5）、将所得的鱼皮蛋白多肽-乳糖冻干粉在50～60℃、相对湿度为76～79%条件下反应15～20小时，得基于糖修饰的鱼皮抗冻蛋白多肽。

2.按照权利要求1所述的鱼皮抗冻蛋白多肽，其特征在于其步骤（1）中所述的鱼皮来自于河豚鱼、鳕鱼、马面鱼或鲽鱼。

3.按照权利要求1所述的鱼皮抗冻蛋白多肽，其特征在于其步骤（1）中所述的鱼皮解冻的时间为5～10小时；所述的清洗鱼皮的水的温度为10～12℃。

4.按照权利要求1所述的鱼皮抗冻蛋白多肽，其特征在于其步骤（2）中所述的超声波的频率为25-30kH。

5.权利要求1所述的基于糖修饰的鱼皮抗冻蛋白多肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）、将冷冻鱼皮在10～12℃下进行解冻，然后用水将鱼皮清洗干净，再将鱼皮打成浆，得鱼皮浆；接着向鱼皮浆中加入2.0～5.0倍鱼皮浆重量的水，然后利用胶体磨将鱼皮浆磨成鱼皮浆液，再在3000～5000g条件下离心5～8分钟，去上层脂肪，得去脂鱼皮浆液；

（2）、将去脂鱼皮浆液用超声波处理5～10分钟；然后按照0.4～0.7%鱼皮重量的重量百分比比例向经过超声波处理的鱼皮浆液体中加入风味蛋白酶，在40～50℃、pH6.5～7.5条件下进行酶解反应1.5～2.5小时；再在85～90℃下保温3～5分钟，冷却至室温；在3000～5000g条件下离心3～6分钟，收集上清液；

（3）、将步骤（2）所得的上清液通过二步超滤方法进行处理，先用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，取滤过液，得分子量小于5000的多肽，再将滤过液用孔径为3000道尔顿的陶瓷膜超滤，截留分子量为3000～5000道尔顿的多肽，冷冻干燥，得鱼皮蛋白多肽粉；

（4）、按照鱼皮蛋白多肽粉和乳糖之间质量比为3.5～5:1的比例将鱼皮蛋白多肽粉和乳糖混合，然后溶解于去离子水中，轻轻搅拌5～10分钟，溶液最终浓度为12～15%（w/w）；冷冻干燥，得鱼皮蛋白多肽-乳糖冻干粉；

（5）、将所得的鱼皮蛋白多肽-乳糖冻干粉在50～60℃、相对湿度为76～79%条件下反应15～20小时，得基于糖修饰的鱼皮抗冻蛋白多肽。

6.按照权利要求5所述的制备方法，其特征在于其步骤（1）中所述的鱼皮来自于河豚鱼、鳕鱼、马面鱼或鲽鱼。

7.按照权利要求5所述的制备方法，其特征在于其步骤（1）中所述的鱼皮解冻的时间为5～10小时；所述的清洗鱼皮的水的温度为10～12℃。

8.按照权利要求5所述的制备方法，其特征在于其步骤（2）中所述的超声波的频率为25～30kH。

9.权利要求1～4任一所述的鱼皮抗冻蛋白多肽在微生物抗冻保护上的应用。